Re leboga go etela Nature.com.Phetolelo ya sephephediši yeo o e šomišago e na le thekgo ye e lekanyeditšwego ya CSS.Bakeng sa maitemogelo a mabotse, re kgothaletša gore o šomiše sephephediši se se mpshafaditšwego (goba o time mokgwa wa go sepelelana go Internet Explorer).Mo nakong ye, go netefatša thekgo ye e tšwelago pele, re tla bontšha sebaka ntle le ditaele le JavaScript.
Insulin nanoparticles (NPs) le phahameng loading dikahare ba fumane dikopo fapaneng ka tekanyetso diforomo tse fapaneng.Mosebetsi ona o ikemiseditse ho hlahloba phello ea freeze-omisa le spray-omisa dithulaganyo ka sebopeho sa insulin-imetsoeng chitosan nanoparticles, le kapa ntle le mannitol e le cryoprotectant.We hape hlahloba boleng ba nanoparticles tsena ka redissolving bona.Before dehydration, bogolo bja dikarolwana tša chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin cross-linked nanoparticles e be e optimized go ba 318 nm, PDI e be e le 0.18, bokgoni bja encapsulation e be e le 99.4%, gomme go rwala e be e le 25.01%.After reconstitution, di-nanoparticles ka moka, ntle le tšeo di tšweleditšwego ka mokgwa wa freeze-drying ntle le tšhomišo ya mannitol, boloka bona nkgokolo dikarolwana structure.Compared le mannitol-e nang le nanoparticles dehydrated ke e ka ba spray, mannitol-free spray-omisitsoeng nanoparticles hape bontšitse nyenyane ka ho fetisisa bolela dikarolwana boholo (376 nm) le phahameng ka ho fetisisa loading dikahare (25.02%) le tšoanang encapsulation sekhahla (98.7%) le PDI (0.20) ka omisa kapa dithekniki tša go omiša ka go gatsetša.Dikarolwana tše di omilego ka go omiša ka go gaša ntle le mannitol le tšona di feleleditše ka go lokollwa ka lebelo kudu ga insulin le bokgoni bjo bo phagamego kudu bja go tšewa ga disele.Mošomo wo o bontšha gore go omiša ka go gaša go ka ntšha meetse dikarolwana tša nano tša insulin ntle le go nyakega ga di-cryoprotectant ge go bapetšwa le mekgwa ye e tlwaelegilego ya go omiša ka go gatsetša, go hlola bokgoni bjo bogolo bja go rwala, dinyakwa tša tlaleletšo tša fase le go šoma ditjeo mohola o mogolo.
Ga e sa le e utollwa ka 19221,2,3, insulin le ditokišetšo tša yona tša dihlare di phološitše maphelo a balwetši bao ba nago le bolwetši bja swikiri bja mohuta wa pele (T1DM) le bolwetši bja swikiri bja mohuta wa bobedi (T1DM).Le ge go le bjalo, ka lebaka la dithoto tša yona bjalo ka proteine ​​ya boima bja dimolekule bjo bo phagamego, insulin e kgoboketšwa gabonolo, e arolwa ke diensaeme tša proteolytic, gomme ya fedišwa ke go feta ga mathomo effect.Batho bao ba lemogilwego gore ba na le bolwetši bja swikiri bja mohuta wa pele ba hloka diente tša insulin bophelo bja bona ka moka.Balwetši ba bantši bao mathomong ba hweditšwego ba na le bolwetši bja swikiri bja mohuta wa bobedi le bona ba nyaka diente tša insulin tša nako ye telele.Diente tša insulin tša letšatši le letšatši ke mothopo o mogolo wa bohloko bja letšatši le letšatši le go se iketle go batho ba, ka ditlamorago tše mpe bophelong bjo bobotse bja monagano.Ka lebaka leo, mehuta ye mengwe ya taolo ya insulin yeo e bakago go se iketle mo gonyenyane, mo go bjalo bjalo ka taolo ya insulin ya molomo, di ithutwa kudu5 ka ge di na le bokgoni bja go bušetša boleng bja bophelo bja batho ba ka bago dibilione tše 5 bao ba nago le bolwetši bja swikiri lefaseng ka bophara.
Theknolotši ya di-nanoparticle e file tšwelopele e kgolo maitekong a go tšea insulin ya molomo4,6,7.E nngwe yeo e akaretšago le go šireletša insulin ka mo go atlegilego go senyegeng bakeng sa go tlišwa mo go nepišitšwego go mafelo a itšego a mmele.Le ge go le bjalo, tšhomišo ya ditlhamo tša dikarolwana tša nano e na le mellwane ye mmalwa, kudukudu ka lebaka la ditaba tša go tsepama ga dikarolwana tše di emišitšwego.Go kgoboketšwa mo gongwe go ka direga nakong ya poloko, yeo e fokotšago go hwetšagala ga diphedi ga insulin-loaded nanoparticles8.Go tlaleletša, go tsepama ga dikhemikhale ga matrix ya polymer ya dinanoparticles le insulin le gona go swanetše go elwa hloko go netefatša go tsepama ga di-nanoparticle tša insulin (NPs).Ga bjale, theknolotši ya go omiša ka go gatsetša ke maemo a gauta a go hlola di-NP tše di tsepamego mola e thibela diphetogo tše di sa nyakegego nakong ya poloko9.
Le ge go le bjalo, go omiša ka go gatsetša go nyaka tlaleletšo ya di-cryoprotectant go thibela sebopego sa nkgokolo sa di-NP gore se se amege ke kgateletšego ya motšhene ya dikristale tša leqhwa.Se se fokotša kudu go rwala dikarolwana tša nano tša insulin ka morago ga lyophilization, ka ge sešireletši sa cryoprotectant se tšea bontši bja tekanyo ya boima bja mmele.Ka fao, di-NP tša insulin tše di tšweleditšwego gantši di hwetšwa di sa swanela tlhagišo ya ditlhamo tša phofo ye e omilego, tše bjalo ka matlapa a molomo le difilimi tša molomo, ka lebaka la go nyakega ga palo ye kgolo ya dikarolwana tše di omilego tša nano go fihlelela lefasetere la kalafo la insulin.
Go omiša ka go gaša ke tshepedišo ye e tsebegago le ye e sa bitšego kudu ya tekanyo ya intasteri ya go tšweletša diphofo tše di omilego go tšwa go dikgato tša seela ka intastering ya dihlare10,11.Taolo godimo ga tshepedišo ya go bopa dikarolwana e dumelela go khupetšwa ga maleba ga metswako ye mmalwa ya bioactive 12, 13 .Go feta fao, e fetogile thekniki ye e šomago ya go lokišetša diproteine ​​tše di khupeditšwego bakeng sa taolo ya molomo.During go omiša ka go gaša, meetse a moyafala ka pela kudu, yeo e thušago go boloka themperetšha ya mokokotlo wa dikarolwana e le fase11,14, go kgontšha tirišo ya yona go encapsulate dikarolo tšeo di nago le kwelobohloko ya phišo.Before go omiša ka go gaša, dilo tša go tlotša di swanetše go homogenized ka botlalo le tharollo yeo e nago le metswako ye e encapsulated11,14.Unlike freeze-drying, homogenization pele encapsulation ka spray-omisa kaonafatša encapsulation bokgoni nakong dehydration.Ka ge tshepedišo ya go gaša-omisa encapsulation e sa nyake cryoprotectants, spray-omisa ka sebediswa ho hlahisa omisitsoeng NPs le phahameng loading diteng.
Thuto ye e bega tšweletšo ya di-NP tše di tletšego insulin ka go kgokaganya sefapano sa chitosan le sodium tripolyphosphate ka go šomiša mokgwa wa ion gel.Ion gelation ke mokgwa wa go lokišetša wo o dumelelago tšweletšo ya dikarolwana tša nano ka ditirišano tša mohlagase magareng ga mehuta ye mebedi goba go feta ya ionic ka fase ga maemo a itšego.Bobedi dithekniki tša go omiša ka go gatsetša le go omiša ka go gaša di ile tša šomišwa go ntšha meetse ka chitosan/sodium ye e lokišitšwego tripolyphosphate/insulin cross-linked nanoparticles.After dehydration, sebopeho sa bona se ile sa sekaseka ka SEM.The bona recombination bokgoni ile hlahlojoa ka ho lekanya bona boholo kabo, bokagodimo tefo, PDI, encapsulation bokgoni, le loading content.The boleng ba resolubilized nanoparticles hlahiswa ke mekgwa e fapaneng dehydration e ile ea boela ea hlahlojoa ka ho bapisa bona insulin tšireletso, lokolloa boitšoaro, lokolloa boitšoaro, le go šoma gabotse ga go amogelwa ga disele.
pH ya tharollo ye e hlakantšwego le tekanyo ya chitosan le insulin ke mabaka a mabedi a bohlokwa ao a amago bogolo bja dikarolwana le bokgoni bja go khupetša (EE) bja di-NP tša mafelelo, ka ge di ama ka go lebanya tshepedišo ya gelation ya ionotropic.The pH ya tharollo ye e hlakantšwego e bontšhitšwe e amana kudu le bogolo bja dikarolwana le bokgoni bja go khupetša (Fig. 1a).Bjalo ka ge go bontšhitšwe go Seswantšho 1a, ka ge pH e oketšegile go tšwa go 4.0 go ya go 6.0, palogare ya bogolo bja dikarolwana (nm) e ile ya fokotšega gomme EE ya oketšega kudu, mola ge pH e oketšega go fihla go 6.5, palogare ya bogolo bja dikarolwana e ile ya thoma go oketšega gomme EE ya dula e sa fetoge.Ge tekanyo ya chitosan go insulin e oketšega, palogare ya bogolo bja dikarolwana le yona e a oketšega.Go feta moo, ga go na phetogo ya EE yeo e lemogilwego ge dikarolwana tša nano di be di lokišitšwe ka tekanyo ya boima bja chitosan / insulin e phahameng ho feta 2.5: 1 (w / w) (Fig. 1b).Ka hona, maemo a loketseng ho lokisetsa thutong ena (pH 6.0, chitosan / insulin boima karo-karolelano ea 2.5: 1) ba ile ba sebediswa ho lokisetsa insulin-loaded nanoparticles bakeng sa thuto e eketsehileng.Under ena ho lokisetsa boemo, karolelano dikarolwana boholo ba insulin nanoparticles ile optimized ho ba 318 nm (Fig. 1c), le PDI e ne e le 0.18, bokgoni embedding e ne e le 99.4%, bokgoni ba zeta e ne e le 9.8 mv, 'me insulin loading e ne e le 25.01% (m / m ).Thehiloeng phetiso elektrone microscopy (TEM) diphetho, le optimized nanoparticles ne ka hoo e ka bang nkgokolo le discrete le batlang e le junifomo boholo (Fig. 1d).
Paramethara optimization ya insulin nanoparticles: (a) phello ea pH ka bophara bophara le encapsulation bokgoni (EE) ya insulin nanoparticles (lokisetsa ka 5: 1 boima karo-karolelano ya chitosan le insulin); (b) chitosan le Tšhušumetšo ya tekanyo ya boima bja insulin godimo ga bophara bja magareng le bokgoni bja go khupetša (EE) bja di-NP tša insulin (tšeo di lokišitšwego ka pH 6); (c) dikarolwana boholo kabo ya optimized insulin nanoparticles; (d) TEM micrograph ya di-NP tša insulin tše di lokišitšwego .
Go tsebega gabotse gore chitosan ke polyelectrolyte ye e fokolago yeo e nago le pKa ya 6.5.E na le tefo ye botse ka gare ga methopo ya ditaba ya esiti ka lebaka la gore sehlopha sa yona se segolo sa amino se protonated ke di-ion tša hydrogen15.Ka fao, gantši e šomišwa bjalo ka morwadi go encapsulate macromolecules ye e nago le tefo ye mpe.Mo nyakišišong ye, chitosan e šomišitšwe go encapsulate insulin ka ntlha ya isoelectric ya 5.3.Ka ge chitosan e šomišwa bjalo ka sedirišwa sa go tlotša, ka go oketšega ga karolo ya yona, botenya bja legato la ka ntle la dikarolwana tša nano bo oketšega ka go swana, go feletša ka bogolo bjo bogolo bja dikarolwana tša palogare.Go tlaleletša, maemo a godimo a chitosan a ka encapsulate insulin ye ntši.Tabeng ya rena, EE e be e le ye kgolo kudu ge tekanyo ya chitosan le insulin e fihla go 2.5:1, gomme go be go se na phetogo ye kgolo go EE ge tekanyo e be e dula e oketšega.
Ntle le tekanyo ya chitosan le insulin, pH le yona e kgathile tema ye bohlokwa go lokišetšeng di-NP.Gan et al. 17 ithutile phello ea pH ka boholo ba dikarolwana tsa chitosan nanoparticles.Ba fumane ho fokotseha ho tsoelang pele ha dikarolwana boholo ho fihlela pH fihla 6.0, 'me koketšego e kgolo ya dikarolwana boholo ile hlokometse ka pH > 6.0, e leng lumellana le observations.This ketsahalo ena ke ka lebaka la 'nete ea hore ka ho eketseha pH, molek'hule insulin acquires a mpe bokagodimo tefo, ka tsela eo, ratang ditirišano tša electrostatic le chitosan/sodium tripolyphosphate (TPP) complex, go feletša ka bogolo bja dikarolwana tše nnyane le EE ya godimo .Le ge go le bjalo, ge pH e be e beakanywa go 6.5, dihlopha tša amino godimo ga chitosan di ile tša deprotonated, go feletša ka go phuthwa ga chitosan.Ka go realo, pH ya godimo e feleletša ka go pepentšhwa ga di-ion tša amino go TPP le insulin, go feletša ka go kgokaganya ga fase, palogare ya mafelelo ye kgolo bogolo bja dikarolwana le EE ya tlase.
Tshekatsheko ya dithoto tša sebopego sa di-NP tše di omilego ka go gatsetša le tše di omišitšwego ka go gaša e ka hlahla kgetho ya dithekniki tše kaone tša go felelwa ke meetse le go bopa phofo.Mokgwa wo o kgethilwego o swanetše go fa go tsepama ga diokobatši, sebopego sa dikarolwana tše di swanago, go rwala ga diokobatši mo go phagamego le go qhibidiga gabotse ka gare ga tharollo ya mathomo.Mo thutong ye, go bapetša gakaone dithekniki tše pedi, di-NP tša insulin tšeo di nago le goba tšeo di se nago 1% ya mannitol di ile tša šomišwa nakong ya go felelwa ke meetse.Mannitol e šomišwa bjalo ka e bulking moemeli kapa cryoprotectant ka fapaneng omileng phofo formulations bakeng sa freeze omisa le spray drying.For the lyophilized insulin nanoparticles ntle le mannitol, joalokaha ho bontšitsoe ka Figure 2a, e haholo porous phofo sebopeho le kgolo, sa kamehla le makgwakgwa bokagodimo se ile sa hlokomelwa tlas'a skena elektrone microscopy (SEM).Few discrete dikarolwana ba ile ba lemogwa ka phofo ka mor'a dehydration (Fig. 2e).Dipoelo tše di bontšhitše gore bontši bja di-NP di ile tša bola nakong ya go omišwa ka go gatsetša ntle le cryoprotectant efe goba efe.Bakeng sa dikarolwana tša insulin tšeo di omilego ka go gatsetša le tšeo di omilego ka go gaša tšeo di nago le 1% ya mannitol, dikarolwana tša nano tša nkgokolo tšeo di nago le bokagodimo bjo bo boreledi di ile tša bonwa (Fig. 2b,d,f,h).Dikarolwana tša nano tša insulin tšeo di omišitšwego ka go gaša ntle le mannitol di ile tša dula e le tša nkgokolo eupša e wrinkled ka godimo (Fig. 2c).Spherical le wrinkled bokagodimo bo ahlaahlwa gape ka go lokolla boitshwaro le disele uptake diteko ka tlase.Go ya ka ponagalo e bonagalago ya NPs omišitšwego, bobedi spray-omišitšwego NPs ntle le mannitol le NPs freeze-omisitsoeng le spray-omisitsoeng ka mannitol yielded fine NPs phofo (Fig. 2f,g,h).Ge lefelo la bokagodimo le legolo magareng ga bokagodimo bja dikarolwana, ke moo go qhibidiga go lego godimo gomme ka fao ke moo seelo sa go lokollwa se lego godimo.
Sebopego sa di-NP tša insulin tše di fapanego tše di se nago meetse: (a) Seswantšho sa SEM sa di-NP tša insulin tše di lyophilized ntle le mannitol; (b) Seswantšho sa SEM sa di-NP tša insulin tšeo di lyophilized ka mannitol; (c) di-NP tša insulin tšeo di omilego ka go gaša ntle le seswantšho sa mannitol SEM sa ; (d) Seswantšho sa SEM sa di-NP tša insulin tšeo di omišitšwego ka go gaša ka mannitol; (e) seswantšho sa phofo ya insulin NPs yeo e lyophilized ntle le mannitol; (f) seswantšho sa di-NP tša insulin tše di lyophilized ka mannitol; ( g) Seswantšho sa phofo ya insulin NPs yeo e omilego ka go gaša ntle le mannitol; (h) seswantšho sa phofo ya insulin NPs yeo e omilego ka go gaša ka mannitol.
Nakong ya go omiša ka go gatsetša, mannitol e šoma bjalo ka cryoprotectant, e boloka di-NP ka mokgwa wa go hloka sebopego le go thibela tshenyo ya dikristale tša leqhwa19.Ka go fapana, ga go na kgato ya go gatsetša nakong ya go omiša ka go gaša.Ka fao mannitol ga e nyakege mokgweng wo.Ge e le gabotse, di-NP tše di omilego ka go gaša tšeo di se nago mannitol di tšweleditše di-NP tše botse bjalo ka ge go hlalošitšwe peleng.Le ge go le bjalo, ga go na kgato ya go gatsetša nakong ya go omiša ka go gaša. mannitol e sa dutše e ka šoma bjalo ka selo sa go tlatša tshepedišong ya go omiša ka go gaša go fa di-NP sebopego sa nkgokolo kudu20 (Fig. 2d), seo se thušago go hwetša boitshwaro bja go lokollwa bjo bo swanago bja di-NP tše bjalo tše di khupeditšwego.Go tlaleletša, go molaleng gore dikarolwana tše dingwe tše kgolo di ka lemogwa ka bobedi di-NP tša insulin tšeo di omilego ka go gatsetša le tšeo di omilego ka go gaša tšeo di nago le mannitol (Fig. 2b,d), tšeo di ka bago ka lebaka la go kgoboketšwa ga mannitol ka gare ga mokokotlo wa dikarolwana mmogo le insulin yeo e khupeditšwego. Go.Chitosan layer.Go bohlokwa go lemoga gore mo nyakišišong ye, e le gore go netefatšwe gore sebopego sa nkgokolo se dula se sa senyege ka morago ga go felelwa ke meetse, tekanyo ya mannitol le chitosan e bolokwa go 5:1, gore palo ye kgolo ya filler e ka godiša gape bogolo bja dikarolwana tša di-NP tše di omilego.
Fourier transform infrared attenuated total reflection (FTIR-ATR) spectroscopy tšoauoa motsoako oa 'mele oa insulin mahala, chitosan, chitosan, TPP le insulin.All dehydrated NPs ba ile ba tšoauoa ka ho sebelisa FTIR-ATR spectroscopy.Notably, sehlopha matla a 1641, 1543 le 1412 cm-1 ba ile ba hlokomela ka encapsulated NPs freeze-omisitsoeng le mannitol le ka NPs spray-omisitsoeng le le ntle le mannitol (Fig. 3). Bjalo ka ge go begilwe peleng, dikoketsego tše tša maatla di be di tswalanywa le go kgokaganya sefapano magareng ga chitosan, TPP le insulin.Dinyakišišo tša tirišano magareng ga chitosan le insulin di bontšhitše gore ka go dispektra tša FTIR tša di-nanoparticle tša chitosan tšeo di imetšwego ka insulin, sehlopha sa chitosan se ile sa kopana le sa insulin, go oketša carbonyl intensity (1641 cm-1) le amine (1543 cm-1) lebanta.Dihlopha tša tripolyphosphate tša TPP di kgokagantšwe le dihlopha tša ammonium ka gare ga chitosan, di bopa sehlopha ka 1412 cm-1.
Dispektra tša FTIR-ATR tša insulin ya mahala, chitosan, metswako ya mmele ya chitosan/TPP/insulin le di-NP tšeo di tlošitšwego meetse ka mekgwa ye e fapanego.
Go feta fao, dipoelo tše di sepelelana le tšeo di bontšhitšwego ka go SEM, yeo e bontšhitšego gore di-NP tše di khupeditšwego di ile tša dula di sa senyega ka bobedi ge di gašwa le go omišwa ka go gatsetša ka mannitol, eupša ka go se be gona ga mannitol, ke fela go omišwa ka go gaša mo go tšweleditšego dikarolwana tše di khupeditšwego.Ka go fapana, dipoelo tša spektra tša FTIR-ATR tša di-NP tše di omišitšwego ka go gatsetša ntle le mannitol di be di swana kudu le motswako wa mmele ya chitosan, TPP, le insulin.Sephetho se se laetša gore dikgokagano tša sefapano magareng ga chitosan, TPP le insulin ga di sa le gona ka go NPs tšeo di omilego ka go gatsetša ntle le mannitol.Sebopego sa NPs se ile sa senywa nakong ya go omišwa ka go gatsetša ntle le cryoprotectant, yeo e ka bonwago ka dipoelong tša SEM (Fig. 2a).Go ya ka dipoelo tša sebopego le FTIR tša di-NP tša insulin tše di se nago meetse, fela di-NP tšeo di lyophilized, tšeo di omišitšwego ka go gaša, le tšeo di se nago mannitol di ile tša dirišwa bakeng sa diteko tša go bopa lefsa le di-NP tšeo di se nago mannitol ka baka la go bola ga di-NP tšeo di se nago mannitol nakong ya go felelwa ke meetse. ahlaahla.
Go felelwa ke meetse go šomišwa go boloka nako ye telele le go šongwa gape go ba ditlhamo tše dingwe.Bokgoni bja di-NP tše di omilego tša go bopa gape ka morago ga poloko bo bohlokwa kudu bakeng sa tšhomišo ya tšona ka ditlhamong tše di fapanego tša go swana le matlapa le difilimi.Re lemogile gore bogolo bja dikarolwana tša magareng tša di-NP tša insulin tše di omilego ka go gaša ge go se na mannitol bo oketšegile gannyane fela ka morago ga go bopa leswa.Ka lehlakoreng le lengwe, bogolo bja dikarolwana tša tšeo di omilwego ka go gaša le freeze-omisitsoeng insulin nanoparticles le mannitol eketsehile haholo (Table 1).PDI le EE ba ne ba sa fetoloa haholo (p > 0.05) ka mor'a recombination ya NPs tsohle thutong ena (Table 1).Sephetho sena se bontša hore boholo ba dikarolwana ile a lula a sa senyeha ka mor'a redissolving.Leha ho le joalo, ho phaella ka ho fetisisa ha mannitol fellang kateng le haholo fokotseha insulin mojaro oa lyophilized le di-nanoparticle tša mannitol tšeo di omilego ka go gaša (Table 1).Ka go fapana, diteng tša mošomo wa insulin tša di-NP tšeo di omišitšwego ka go gaša ntle le mannitol di ile tša dula di swana le pele (Table 1).
Go tsebega gabotse gore go rwala dikarolwana tša nano go bohlokwa ge go šomišwa ka merero ya go tliša diokobatši.Bakeng sa di-NP tšeo di nago le merwalo ya fase, go nyakega palo ye kgolo kudu ya dilo tše di bonagalago go fihlelela moedi wa kalafo.Le ge go le bjalo, viscosity ye kgolo ya mahloriso a godimo bjalo a NP e lebiša go go se loke le bothata bja taolo ya molomo le ditlhamo tša go hlabja, ka go latelelana 22 .Go tlaleletša, di-NP di ka gape di šomišwa go dira matlapa le di-biofilm tše di kgomarelago23, 24, yeo e nyakago tšhomišo ya palo ye kgolo ya di-NP maemong a fase a go rwala, go feletša ka matlapa a magolo le di-biofilm tše koto tšeo di sa lokelago dikgopelo tša molomo.Ka fao, di-NP tše di se nago meetse tšeo di nago le mošomo wo mogolo wa insulin di kganyogwa kudu.Dipoelo tša rena di šišinya gore mošomo wo mogolo wa insulin wa di-NP tše di omilego ka go gaša tšeo di se nago mannitol di ka fa tše ntši mehola e kgahlišago bakeng sa mekgwa ye e mengwe ya go tliša.
Di-NP ka moka tše di se nago meetse di ile tša bolokwa ka setšidifatšing dikgwedi tše tharo.Dipoelo tša SEM di bontšhitše gore sebopego sa di-NP ka moka tše di se nago meetse ga se sa fetoga kudu nakong ya polokelo ya dikgwedi tše tharo (Fig. 4).Ka morago ga go bopša gape ka meetseng, di-NP ka moka di bontšhitše go fokotšega go se nene ga EE gomme tša lokolla mo e ka bago tekanyo e nyenyane (~5%) ya insulin nakong ya polokelo ya dikgwedi tše tharo (Lenaneo 2).Le ge go le bjalo, karolelano ya bogolo bja dikarolwana tša di-nanoparticle ka moka e ile ya oketšega.Bogolo bja dikarolwana tša di-NP tšeo di omišitšwego ka go gaša ntle le mannitol bo ile bja oketšega go fihla go 525 nm, mola bja di-NP tšeo di omilego ka go gaša le tšeo di omilego ka go gatsetša ka mannitol bo oketšegile go fihla go 872 le 921 nm, ka go latelelana (Table 2).
Sebopego sa di-NP tša insulin tše di fapanego tše di se nago meetse tšeo di bolokilwego dikgwedi tše tharo: (a) Seswantšho sa SEM sa di-NP tša insulin tše di lyophilized ka mannitol; (b) SEM setšoantšo sa spray-omisitsoeng insulin nanoparticles ntle le mannitol; (c) ntle le mannitol SEM diswantšho tša di-NP tša insulin tšeo di omilego ka go gaša.
Go feta fao, dipula di ile tša bonwa ka gare ga dikarolwana tša insulin tše di bopilwego lefsa tšeo di omišitšwego ka go gaša ka mannitol le go omišwa ka go gatsetša (Fig. S2).Se se ka bakwa ke dikarolwana tše kgolo tšeo di sa emišego gabotse ka meetseng.Dipoelo ka moka tše di lego ka mo godimo di bontšha gore thekniki ya go omiša ka go gaša e ka šireletša dikarolwana tša insulin go tšwa go go felelwa ke meetse le gore merwalo ye e phagamego ya dikarolwana tša nano tša insulin e ka hwetšwa ntle le di-filler goba di-cryoprotectant tša go šireletša.
Go bolokwa ga insulin go ile gwa lekwa ka pH = 2.5 medium ka pepsin, trypsin, le α-chymotrypsin go bontšha bokgoni bja tšhireletšo bja di-NP kgahlanong le tšhilo ya dijo ya ensaeme ka morago ga go felelwa ke meetse.Go bolokwa ga insulin ga di-NP tše di se nago meetse go ile gwa bapetšwa le ga di-NP tšeo di sa tšwago go lokišwa, gomme insulin ya mahala e ile ya dirišwa bjalo ka taolo e mpe.Mo nyakišišong ye, insulin ya mahala e bontšhitše go fedišwa ka lebelo ga insulin ka gare ga 4 h ka dikalafo ka moka tše tharo tša enzymatic (Fig. 5a–c).Ka go fapana, teko ya go fediša insulin ya di-NP tšeo di omilego ka go gatsetša ka mannitol le di-NP tšeo di omilego ka go gaša ka goba ntle le mannitol di bontšhitše tšhireletšo e phagamego kudu ya di-NP tše kgahlanong le tšhilo ya dijo ya ensaeme, yeo e bego e swana le ya di-NP tšeo di sa tšwago go lokišetšwa insulin ( seswantšho 1).5a-c).Ka thušo ya dikarolwana tša nano ka pepsin, tšeo di omilego ka go gaša ka go gaša. trypsin, le α-chymotrypsin, go feta 50%, 60%, le 75% ya insulin e be e ka šireletšwa ka gare ga 4 h, ka go latelelana (Fig. 5a–c).Bokgoni bjo bja go šireletša insulin bo ka oketša kgonagalo ya go monya insulin ye e phagamego mading25.Dipoelo tše di šišinya gore go omiša ka go gaša ka mannitol goba ntle le mannitol le go omišwa ka go gatsetša ka mannitol go ka boloka bokgoni bja go šireletša insulin bja di-NP ka morago ga go felelwa ke meetse mmeleng.
Tšhireletšo le boitshwaro bja go lokollwa ga di-NP tša insulin tše di se nago meetse: (a) tšhireletšo ya insulin ka gare ga tharollo ya pepsin; (b) tšhireletšo ya insulin ka gare ga tharollo ya trypsin; (c) tšhireletšo ya insulin ka tharollo ya α-chymotrypsin; ( d) Boitshwaro bja go lokollwa ga di-NP tše di se nago meetse ka gare ga tharollo ya pH = 2.5; (e) boitshwaro bja go lokollwa ga di-NP tše di se nago meetse ka gare ga tharollo ya pH = 6.6; (f) boitshwaro bja go lokollwa ga di-NP tše di se nago meetse ka gare ga tharollo ya pH = 7.0.
Di-NP tša insulin tše di omilego tšeo di sa tšwago go lokišwa le go bopša gape di ile tša bjalwa ka gare ga di-buffer tše di fapa-fapanego (pH = 2.5, 6.6, 7.0) ka 37 °C, di ekiša tikologo ya pH ya mala, duodenum, le mala a manyenyane a ka godimo, go hlahloba mafelelo a insulin go kganetšo ya insulin. Boitshwaro bja go lokolla ditikologong tše di fapanego.Karolwana ya pampišana ya ka mpeng.Ka pH = 2.5, di-NP tšeo di imetšwego ka insulin le di-NP tša insulin tše di omilego tšeo di rarollegilwego di bontšhitše go lokollwa ga mathomo ga go phatloga ka gare ga iri e tee ya mathomo, gomme gwa latelwa ke go lokollwa ka go nanya diiri tše 5 tše di latelago (Fig. 5d).Go lokollwa mo ka lebelo mathomong go na le kgonagalo e kgolo ya gore ke sephetho sa go tlošwa ka lebelo ga dimolekule tša bokagodimo bja proteine ​​tšeo di sego ka botlalo immobilized ka sebopeho ka hare sa particle.At pH = 6.5, insulin-imetsoeng NPs le reconstituted o omileng insulin NPs bontšitse e boreleli le butle ho lokolloa ka 6 h, e le pH ya tharollo teko e ne e tšoana le ea NPs-lokisetsa tharollo (Fig. 5e).Ka pH = 7, NPs ne a sa tsitsitseng le hoo e ka bang ka ho feletseng bola ka hare ho lihora tse peli pele (Fig. 5f).Se ke ka lebaka la gore deprotonation ya chitosan e direga ka pH ye e phagamego, yeo e feleletšago ka netweke ya polymer ye e sego ya kopana kudu le go lokollwa ga insulin ye e imetšwego.
Go feta fao, di-NP tša insulin tšeo di omišitšwego ka go gaša ntle le mannitol di bontšhitše profaele ya go lokollwa ka lebelo go feta di-NP tše dingwe tše di se nago meetse (Fig. 5d–f).Bjalo ka ge go hlalošitšwe peleng, di-NP tša insulin tše di bopilwego lefsa tšeo di omilego ntle le mannitol di bontšhitše bogolo bjo bonyenyane kudu bja dikarolwana.Dikarolwana tše nnyane di fa lefelo le legolo la bokagodimo, ka fao bontši bja seokobatši sa maleba bo tla ba goba kgauswi le bokagodimo bja dikarolwana, go feletša ka go lokollwa ka lebelo ga diokobatši26.
Cytotoxicity ya NPs e ile ya nyakišišwa ka MTT assay.Bjalo ka ge go bontšhitšwe go Seswantšho S4, di-NP ka moka tše di se nago meetse di hweditšwe di se na mafelelo a magolo go go kgona ga sele ka mahloriso a 50-500 μg/ml, e šišinya gore di-NP ka moka tše di se nago meetse di ka šomišwa ka polokego go fihlelela lefasetere la kalafo.
Sebete ke setho se segolo seo insulin e šomišago mešomo ya yona ya mmele ka sona.Disele tša HepG2 ke mola wa sele ya hepatoma ya motho yeo e šomišwago ka tlwaelo bjalo ka mohlala wa go tšea disele tša hepatocyte ka gare ga vitro.Mo, disele tša HepG2 di ile tša šomišwa go hlahloba go tšewa ga disele tša di-NP tšeo di se nago meetse ka go šomiša mekgwa ya go omiša ka go gatsetša le go omiša ka go gaša.Go tšewa ga disele ka go hlahloba ka laser ka confocal ka go šomiša phallo cytometry le pono ka morago ga diiri tše mmalwa tša go duša ka insulin ya mahala ya FITC ka mahloriso a 25 μg/mL, di-NP tšeo di sa tšwago go lokišetša FITC tšeo di tletšego ka insulin le di-NP tše di se nago meetse tšeo di tletšego ka insulin ka mahloriso a insulin a go lekana Dipono tša microscopy ya boleng (CLSM) di ile tša dirwa.Di-NP tše di lyophilized ntle le mannitol di ile tša senywa nakong ya go felelwa ke meetse gomme ga se tša hlahlobja go se test.The intracellular fluorescence intensities ya sa tsoa lokisetsa insulin-imetsoeng NPs, lyophilized NPs le mannitol, le spray-omisitsoeng NPs le le ntle le mannitol (Fig. 6a) e ne e le 4.3, 2.6, 2.4, le 4.1-makhetlo a phahameng ho feta mahala ones.FITC-insulin sehlopha, ka ho latellana (Fig. 6b).These diphetho bontša hore insulin yeo e khupeditšwego e na le matla kudu go tšeeng ga disele go feta insulin ya mahala, kudu-kudu ka baka la bogolo bjo bonyenyane bja dikarolwana tše di nago le insulin tšeo di tšweleditšwego thutong.
Go tšewa ga disele tša HepG2 ka morago ga go duša ga 4 h ka di-NP tšeo di sa tšwago go lokišetša le di-NP tšeo di se nago meetse: (a) Kabo ya go tšewa ga FITC-insulin ke disele tša HepG2.(b) Bolela bja thutafase bja maatla a fluorescence ao a sekasekilwego ka cytometry ya go ela (n = 3), * P <0.05 ge e bapetšwa le insulin ya mahala.
Ka mo go swanago, diswantšho tša CLSM di bontšhitše gore matla a FITC a fluorescence a di-NP tšeo di sa tšwago go lokišetšwa tšeo di imetšwego ka FITC-insulin le di-NP tšeo di omilego ka go gaša tšeo di imetšwego ka insulin (ntle le mannitol) di be di le matla kudu go feta tša disampole tše dingwe (Fig. 6a).Go feta moo, ka go tlaleletšwa ga mannitol, go kgotlelela mo go phagamego ga tharollo go okeditše go ganetša go ya go go tšewa ga disele, go feletša ka go fokotšega ga go ata ga insulin.Dipoelo tše di šišinya gore di-NP tše di omilego ka go gaša tšeo di se nago mannitol di bontšhitše bokgoni bjo bo phagamego kudu bja go tšea disele ka gobane bogolo bja dikarolwana tša tšona e be e le bjo bonyenyane go feta bja di-NP tše di omilego ka go gatsetša ka morago ga go phatlalatšwa gape.
Chitosan (karolelano ya boima bja dimolekule 100 KDa, 75–85% deacetylated) e rekilwe go tšwa go Sigma-Aldrich.(Oakville, Ontario, Canada).Sodium tripolyphosphate (TPP) e rekilwe go tšwa go VWR (Radnor, Pennsylvania, USA).Insulin ya batho yeo e kopantšwego gape yeo e šomišitšwego mo nyakišišong ye e be e le go tšwa go Fisher Scientific (Waltham, MA, USA).Fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled batho insulin le 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) di ile tša rekwa go tšwa go Sigma-Aldrich.(Oakville, Ontario, Canada).Mola wa sele ya HepG2 o hweditšwe go tšwa go ATCC (Manassas, Virginia, USA).Di-reagent tše dingwe ka moka e be e le tša mphato wa go sekaseka goba wa chromatographic.
Lokiša tharollo ya 1 mg/ml ya CS ka go e hlatswa ka meetseng a go hlatswa gabedi (meetse a DD) ao a nago le 0.1% ya esiti ya asetiki.Lokiša ditharollo tša 1 mg/ml tša TPP le insulin ka go di hlatswa ka meetseng a DD le esiti ya asetiki ya 0.1%, ka go latelelana.Emulsion ya pele e be e lokišitšwe ka homogenizer ya polytron PCU-2-110 ya lebelo le legolo (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA).Tshepetšo ya go lokišetša ke ye e latelago: sa mathomo, 2ml ya tharollo ya TPP e tlaleletšwa go 4ml ya tharollo ya insulin, gomme motswako o hlohleletšwa ka 30min gomme wa hlakantšhwa ka botlalo.Ka morago, tharollo ye e hlakantšwego e ile ya tlaleletšwa ka marothodi go tharollo ya CS ka sering ka fase ga go hlohleletša ka lebelo le legolo (10,000 rpm).Metswako e ile ya bolokwa ka fase ga lebelo le legolo hlohleletsago (15,000 rpm) ka leqhoa hlapa bakeng sa 30 mets, 'me ba ile ba fetoloa ho pH itseng ho fumana sefapano-kgokagantswe insulin NPs.To ho feta homogenize le ho fokotsa boholo ba dikarolwana tsa insulin NPs, ba ile ba sonicated bakeng sa e eketsehileng 30 mets ka leqhoa hlapa sebelisa probe-mofuta sonicator (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Jeremane).
Insulin NPS ba ile ba lekwa bakeng sa Z-karolelano bophara, polydispersity index (PDI) le zeta bokgoni sebelisa mafolofolo leseli qhala (DLS) litekanyo sebelisa Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, Austria) ka diluting bona ka DD metsi ka 25 ° C.Morphology le boholo kabo ba ile ba tšoauoa ka Hitachi H7600 phetiso elektrone microscope (TEM) (Hitachi, Tokyo, Japane), gomme diswantšho di ile tša sekaseka ka morago ka go šomiša softwere ya go tšea diswantšho ya Hitachi (Hitachi, Tokyo, Japan).Go hlahloba bokgoni bja go khupetša (EE) le bokgoni bja go rwala (LC) bja di-NP tša insulin, di-NP di ile tša pipetted ka gare ga diphaephe tša ultrafiltration ka go kgaolwa ga boima bja dimolekule bja 100 kDa gomme tša centrifuged ka 500 xg bakeng sa 30 min.Unecapsulated insulin ka filtrate ile quantified sebelisa Agilent 1100 Series HPLC tsamaiso (Agilent, Santa Clara, California, USA) bopilwe ka quaternary pompo, autosampler, kholomo hitara, le DAD detector.Insulin ile sekaseka ka C18 kholomo (Zorbax, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, Agilent, USA) le go lemogwa ka 214 nm.The selefouno mohato e ne e le acetonitrile le metsi, e nang le 0.1% TFA, gradient dikabo ho tloha 10 / 90 ho 100 / 0, le matha bakeng sa 10 metsotso.The selefouno mohato o ile a pompša ka sekhahla sa phallo sa 1.0 ml / min.The kholomo mocheso ile beha ho 20 ° C.Bala diphesente tsa EE le LC sebelisa ditekanyetso.(1) le Eq.(2) ya go swana le.
Ditekanyo tša go fapafapana tša CS/insulin go tloga go 2.0 go ya go 4.0 di ile tša lekwa go dira gore insulin NP e šome gabotse.Dipalo tše di fapanego tša tharollo ya CS di ile tša tlaleletšwa nakong ya go lokišetša, mola motswako wa insulin/TPP o ile wa bolokwa o sa fetoge.Di-NP tša insulin di ile tša lokišetšwa ka pH ya 4.0 go ya go 6.5 ka go laola ka kelohloko pH ya motswako ka morago ga go oketša ditharollo ka moka (insulin, TPP le CS).The EE le dikarolwana boholo ba insulin nanoparticles ba ile ba hlahlojoa ka fapaneng pH boleng le CS / insulin boima dikabo ho optimize sebopeho sa insulin NPs.
The optimized insulin NPs ba ile ba behoa ka setshelo aluminium le koahetsoeng ka dinama tse nyenyane tse tightened le ba bang ba theipi.Sursequently, ditshelo screwed ba ile ba behoa ka Labconco FreeZone freeze dryer (Labconco, Kansas City, MO, USA) hlomelloa le terei dryer.The mocheso le lefeela khatello ba ile ba beha ka -10 ° C, 0.350 Torr bakeng sa pele 2 h, le 0 °C le 0.120 Torr bakeng sa 22 h e šetšego ya 24 h go hwetša di-NP tša insulin tše di omilego.
Buchi Mini Spray Dryer B-290 (BÜCHI, Flawil, Switzerland) e ile ya šomišwa go tšweletša insulin ye e khupeditšwego.Ditekanyetšo tša go omiša tše di kgethilwego e be e le: themperetšha ya 100 °C, phallo ya furu 3 L/motsotso, le phallo ya khase 4 L/motsotso.
Insulin NPs pele le ka mor'a dehydration ba ile ba tšoauoa sebelisa FTIR-ATR spectroscopy.Dehydrated nanoparticles hammoho le mahala insulin le chitosan ba ile ba sekaseka sebelisa Spectrum 100 FTIR spectrophotometer (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA) hlomelloa le bokahohleng ATR sampling accessory (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA).Signal dipalogare di hweditšwe go tšwa go diskena tše 16 ka tharollo ya 4 cm2 ka gare ga maqhubu a 4000-600 cm2.
Sebopego sa di-NP tša insulin ye e omilego se ile sa hlahlobja ka diswantšho tša SEM tša di-NP tša insulin tše di omilego ka go gatsetša le tše di omilego ka go gaša tšeo di thopilwego ke Helios NanoLab 650 Focused Ion Beam-Scanning Electron Microscope (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, USA). Paramethara ka sehloohong sebediswa e ne e le gagamalo 5 keV le jwale 30 mA.
Di-NP ka moka tša insulin tše di se nago meetse di ile tša hlapološwa gape ka meetseng a dd.Bogolo bja dikarolwana, PDI, EE le LC di ile tša lekwa gape ka go šomiša mokgwa wo o swanago wo o boletšwego pejana go sekaseka boleng bja tšona ka morago ga go felelwa ke meetse.Go tsepama ga di-NP tša anhydroinsulin go ile gwa lekantšhwa gape ka go leka dithoto tša di-NP ka morago ga poloko ya nako ye telele.Mo nyakišišong ye, di-NP ka moka ka morago ga go felelwa ke meetse di ile tša bolokwa ka setšidifatšing mengwaga ye meraro dikgwedi.Ka morago ga dikgwedi tše tharo tša polokelo, di-NP di ile tša lekwa bakeng sa bogolo bja dikarolwana tša sebopego, PDI, EE le LC.
Hlatswa 5 mL ya di-NP tše di bopilwego lefsa ka gare ga 45 mL yeo e nago le seela sa ka mpeng seo se ekišitšwego (pH 1.2, seo se nago le 1% ya pepsin), seela sa mala (pH 6.8, se se nago le 1% ya trypsin) goba tharollo ya chymotrypsin (100 g/mL, ka gare ga buffer ya phosphate, pH 7.8) go hlahloba go šoma gabotse ga ka go šireletša di-NP ka morago dehydration.Di ile tša bjalwa ka 37°C ka lebelo la go šišinya la 100 rpm.500 μL ya tharollo e ile ya kgoboketšwa ka dintlha tša nako tše di fapanego gomme mahloriso a insulin a ile a laolwa ka HPLC.
Boitshwaro bja go lokollwa ka gare ga vitro bja di-NP tša insulin tšeo di sa tšwago go lokišwa le tšeo di se nago meetse bo ile bja lekwa ka mokgwa wa mokotla wa dialysis (go kgaolwa ga boima bja dimolekule 100 kDa, Spectra Por Inc.).Di-NP tše di omilego tšeo di sa tšwago go lokišwa le tšeo di bopilwego lefsa di ile tša hlatswiwa ka gare ga diela ka pH 2.5, pH 6.6, le pH 7.0 (0.1 M phosphate-buffered saline, saline PBS) go ekiša tikologo ya pH ya mala, duodenum, le mala a mannyane a ka godimo, ka go latelelana.Disampole ka moka di ile tša bjalwa ka 37 °C ka go šišinywa mo go tšwelago pele ka 200 rpm.Aspirate seela ka ntle ga mokotla wa dialysis wa 5 mL ka dinako tše di latelago: 0.5, 1, 2, 3, 4, le 6 h, gomme o tlatše bophagamo ka pela ka tše foreše dialysate.Tšhilafatšo ya insulin ka gare ga seela e ile ya hlahlobja ka HPLC, gomme seelo sa go lokollwa ga insulin go tšwa go dikarolwana tša nano se ile sa balwa go tšwa go tekanyo ya insulin ya mahala yeo e lokolotšwego go palomoka ya insulin yeo e khupeditšwego ka gare ga dikarolwana tša nano (Equation 3).
Mola wa sele ya kankere ya hepatocellular ya batho Disele tša HepG2 di ile tša bjalwa ka gare ga dibjana tša bophara bja 60 mm ka go šomiša Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) yeo e nago le 10% ya serum ya kgomo ya fetus, 100 IU/mL ya penicillin, le 100 μg/mL ya streptomycin29.Ditšo di ile tša hlokomelwa ka 37°C, 95% ya go lekana monola, le 5% CO2.Bakeng sa diteko tša go tšea, disele tša HepG2 di ile tša bjalwa ka 1 × 105 disele/ml godimo ga tshepedišo ya diselaete ya phapoši ya Nunc Lab-Tek ya didiba tše 8 (Thermo Fisher, NY, USA).Bakeng sa diteko tša cytotoxicity, di ile tša bjalwa ka gare ga dipoleiti tša didiba tše 96 (Corning, NY, USA) ka segokanyipalo sa disele tša 5 × 104/ml.
Teko ya MTT e šomišitšwe go sekaseka cytotoxicity ya insulin NPs30 yeo e sa tšwago go lokišetša le yeo e se nago meetse.Disele tša HepG2 di ile tša bjalwa ka gare ga dipoleiti tša didiba tše 96 ka segokanyipalo sa 5 × 104 disele/mL gomme tša godišwa matšatši a 7 pele ga teko.Di-NP tša insulin di ile tša hlapološwa go fihla go ditekanyetšo tše di fapanego (50 go ya go 500 μg/mL) ka gare ga sedirišwa sa setšo gomme ka morago e ile ya laolwa go disele.Ka morago ga diiri tše 24 tša go dušwa, disele di ile tša hlatswiwa ka makga a 3 ka PBS gomme tša bjalwa ka sedirišwa seo se nago le 0.5 mg/ml MTT ka diiri tše 4 tša tlaleletšo.Cytotoxicity e ile ya hlahlobja ka go ela phokotšo ya enzymatic ya tetrazolium MTT ye serolane go ya go formazan ye pherese ka 570 nm ka go šomiša Tecan infinite M200 pro spectrophotometer mmadi wa poleiti (Tecan, Männedorf, Switzerland).
Bokgoni bja go tšea disele bja di-NP bo ile bja lekwa ka microscopy ya go hlahloba ya laser ya confocal le tshekatsheko ya cytometry ya go ela.Sediba se sengwe le se sengwe sa tshepedišo ya diselaete tša phapoši ya Nunc Lab-Tek se ile sa alafša ka FITC-insulin ya mahala, di-NP tše di imetšwego ke FITC-insulin, gomme sa bopa gape 25 μg/mL ya di-NP tša FITC-insulin tše di se nago meetse ka mahloriso a swanago le go bjalwa bakeng sa 4 hours.Cells ba ile ba hlatswiwa ka makhetlo a 3 ka PBS le tsitsiso ka 4% paraformaldehyde.Nuclei ba ne ba stained le 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI).Insulin localization ile hlokomela sebelisa Olympus FV1000 tham mong bang laser skena / tse peli-photon confocal microscope (Olympus, Shinjuku City, Tokyo, Japane).Bakeng sa phallo cytometry and analysis, mahloriso a tšoanang a 10 μg / mL mahala FITC-insulin, FITC-insulin-loaded NPs, le resolubilized dehydrated FITC-insulin NPs ba ile ba eketswa ka 96-sediba lipoleiti seeded le HepG2 lisele tse le incubated bakeng sa lihora tse 4 .Ka mor'a 4 h ya ho dusa, lisele tse ile tsa tlosoa le hlatsoa 3 makhetlo a le FBS.5 × 104 disele ka sampole ba ile ba sekaseka ka BD LSR II phallo cytometer (BD, Franklin Lakes, New Jersey, United States).
Ditekanyetšo ka moka di bontšhwa bjalo ka magareng ± go fapoga ga maemo.Dipapišo magareng ga dihlopha ka moka di ile tša hlahlobja ka go šomiša ANOVA ya tsela e tee goba t-teko ka IBM SPSS Statistics 26 bakeng sa Mac (IBM, Endicott, New York, USA) gomme p <0.05 e ile ya tšewa e le ya bohlokwa go ya ka dipalopalo.
Thuto ye e bontšha go fetofetoga le maemo le bokgoni bja go omiša ka go gaša go ntšha meetse di-nanoparticle tša chitosan/TPP/insulin tšeo di kgokagantšwego ka sefapano ka go bopa lefsa mo go kaone ge go bapetšwa le mekgwa ya go omiša ya maemo ya go gatsetša ka go šomiša didirišwa tša go buša goba bokgoni bja cryoprotectants le bokgoni bja go rwala bjo bo phagamego.The optimized insulin nanoparticles yielded an average particle size of 318 nm and an encapsulation efficiency of 99.4%.Dipoelo tša SEM le FTIR ka morago ga go felelwa ke meetse di bontšhitše gore sebopego sa nkgokolo se be se hlokometšwe fela ka go di-NP tše di omilego ka go gaša tšeo di nago le le ntle le mannitol le go lyophilized ka mannitol, eupša di-NP tše di lyophilized ntle le mannitol di ile tša bola nakong ya go felelwa ke meetse.Ka tekong ya bokgoni bja go bopa gape, dikarolwana tša insulin tšeo di omišitšwego ka go gaša ntle le mannitol di bontšhitše bogolo bja dikarolwana tša mean tše nnyane kudu le mošomo wo o phagamego kudu upon reconstitution.The lokolloa boitšoaro ba tsohle tsena dehydrated NPs bontšitse hore ba ne ba ka potlako lokolloa ka ditharollo tsa pH = 2.5 le pH = 7, 'me haholo tsitsitseng ka tharollo ea pH = 6.5.Bapisoa le tse ling redissolved dehydrated NPs, NPs spray-omisitsoeng ntle le mannitol bontšitse ka potlako lokolloa.This sephetho se lumellana le hore hlokometse ka sele uptake assay, e le di-NP tše di omilego ka go gaša ka go se be gona ga mannitol di nyakile di boloka bokgoni bja go tšea disele tša di-NP tšeo di sa tšwago go lokišetša.Dipoelo tše di šišinya gore dikarolwana tša insulin tše di omilego tšeo di lokišeditšwego ka go omiša ka go gaša ka ntle le mannitol di loketše kudu go šongwa gape go ba dibopego tše dingwe tša tekanyetšo yeo e se nago meetse, go swana le matlapa a molomo goba difilimi tša bioadhesive.
Ka lebaka la ditaba tša thepa ya bohlale, disete tša datha tšeo di tšweleditšwego le/goba tšeo di sekasekilwego nakong ya nyakišišo ya bjale ga di hwetšagale phatlalatša, eupša di hwetšagala go tšwa go bangwadi ba ka go latelana ka kgopelo ye e kwagalago.
Kagan, A. Mohuta wa 2 wa bolwetši bja swikiri: mathomo a leago le a mahlale, mathata a kalafo, le ditlamorago go balwetši le ba bangwe.(McFarlane, 2009).
Singh, A. P., Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. Tlhabollo ya go khupetšwa ga insulin: na taolo ya molomo bjale e a kgonega?J. Khemisi.bio-khemisi.letamo.1, 74-92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Kgatelopele ya morago bjale ka ditshepedišong tša kabo ya liposome tšeo di nago le insulin ya molomo bakeng sa kalafo ya bolwetši bja swikiri.Tlhaloso.J. Khemisi.549, 201-217 (2018).