Sengwalwa ke karolo ya hlogo ya nyakišišo ya “Go kaonafatša go lwantšha dinawa go ditwatši le disenyi”, lebelela diathikele ka moka tše 5
Moemedi wa lebaka la bolwetši bja dibjalo tša fungal necrosis Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary o šomiša leano la maemo a mantši go tšhela dibjalo tša go fapana tša moamogedi. Thuto ye e šišinya tšhomišo ya diamine L-ornithine, e lego amino acid yeo e sego ya proteine ​​yeo e hlohleletšago tswako ya diaminoesiti tše dingwe tše bohlokwa, bjalo ka leano le lengwe la taolo go godiša dikarabelo tša dimolekule, tša fisioloji le tša dikhemikhale tša diphedi tša Phaseolus vulgaris L. go hlobo ye tšhweu yeo e hlolwago ke Pseudomonas sclerotiorum. Diteko tša ka gare ga vitro di bontšhitše gore L-ornithine e thibetše kudu kgolo ya mycelial ya S. pyrenoidosa ka mokgwa wo o ithekgilego ka tekanyo. Go feta moo, e ka fokotša kudu go ba thata ga mouta o mošweu ka tlase ga maemo a go godiša dimela. Go feta fao, L-ornithine e hlohleleditše kgolo ya dibjalo tše di alafilwego, e laetša gore ditekanyetšo tše di lekilwego tša L-ornithine e be e se phytotoxic go dibjalo tše di alafilwego. Go tlaleletša, L-ornithine e ile ya godiša polelo ya di-antioxidant tšeo e sego tša ensaeme (palomoka ya diphenolic tše di qhibidigago le di-flavonoid) le di-antioxidant tša ensaeme (catalase (CAT), peroxidase (POX), le polyphenol oxidase (PPO)), gomme ya oketša polelo ya dikarolwana tše tharo tša leabela tšeo di amanago le antioxidant (PvCAT1, PvSOD, le PvGR). Go feta fao, tshekatsheko ya ka silico e utollotše go ba gona ga proteine ​​ye e akanyetšwago ya oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) ka gare ga genome ya S. sclerotiorum, yeo e bego e swana kudu le diproteine ​​tša oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) tša Aspergillus fijiensis (AfOAH) le Penicillium sp. (PLOAH) go ya ka tshekatsheko ya mošomo, didomene tše di bolokilwego, le topology. Se se kgahlišago ke gore go tlaleletšwa ga L-ornithine go sedirišwa sa moro wa dextrose ya ditapola (PDB) go fokoditše kudu polelo ya lephelo la SsOAH ka go S. sclerotiorum mycelia. Ka mo go swanago, tirišo ya exogenous ya L-ornithine e fokoditše kudu polelo ya lephelo la SsOAH ka gare ga mycelia ya fungal yeo e kgobokeditšwego go tšwa go dibjalo tše di alafilwego. Mafelelong, tirišo ya L-ornithine e fokoditše kudu go ntšhwa ga esiti ya oxalic ka bobedi ka matlakaleng a magareng a PDB le ao a fetetšwego. Ge re phetha, L-ornithine e kgatha tema ye bohlokwa go hlokomela maemo a redox gammogo le go godiša karabelo ya tšhireletšo ya dibjalo tše di fetetšwego. Dipoelo tša nyakišišo ye di ka thuša go hlama mekgwa ya boitlhamelo, ye e se nago bogwera bja tikologo go laola mouta wo mošweu le go fokotša khuetšo ya wona go tšweletšo ya dinawa le dibjalo tše dingwe.
Mouta wo mošweu, wo o hlolwago ke fungus ya necrotrophic Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, ke bolwetši bjo bo senyago, bjo bo fokotšago poelo bjo bo beago tšhošetšo ye kgolo go tšweletšo ya dinawa tša lefase ka bophara (Phaseolus vulgaris L.) (Bolton et al., 2006). Sclerotinia sclerotiorum ke ye nngwe ya ditwatši tša dibjalo tša fungal tše thata kudu tšeo di rwelego mmung go di laola, ka mohuta wo o nabilego wa moamogedi wa mehuta ya dibjalo ya go feta 600 le bokgoni bja go macerate ka lebelo dinama tša moamogedi ka mokgwa wo o sa itšego (Liang le Rollins, 2018). Ka fase ga maemo a sa kgahlišego, e feta kgato ye bohlokwa ya modikologo wa yona wa bophelo, e dula e robetše nako ye telele bjalo ka dibopego tše ntsho, tše thata, tša go swana le peu tše di bitšwago ‘sclerotia’ mo mmung goba bjalo ka dikgolo tše tšhweu, tša go ba le mafofa ka gare ga mycelium goba stem pith ya dibjalo tše di fetetšwego (Schwartz et al., 2005). S. sclerotiorum e kgona go bopa sclerotia, yeo e e dumelelago go phela ka mašemong ao a fetetšwego ka nako ye telele le go phegelela nakong ya bolwetši (Schwartz et al., 2005). Sclerotia e humile ka phepo, e ka phegelela mo mmung ka nako ye telele, gomme e šoma bjalo ka inoculum ya mathomo ya ditwatši tše di latelago (Schwartz et al., 2005). Ka fase ga maemo a mabotse, sclerotia e mela le go tšweletša di-spore tše di sepelago moyeng tšeo di ka fetetšago dikarolo ka moka tša ka godimo ga mmu tša sebjalo, go akaretšwa eupša e sego fela matšoba, dikutu, goba diphotlwa (Schwartz et al., 2005).
Sclerotinia sclerotiorum e šomiša leano la maemo a mantši go tšhela dibjalo tša yona tša moamogedi, yeo e akaretšago lelokelelo la ditiragalo tše di rulagantšwego go tšwa go go mela ga sclerotial go ya go tšweletšo ya dika. Mathomong, S. sclerotiorum e tšweletša di-spore tše di emišitšwego (tšeo di bitšwago ascospores) go tšwa go dibopego tša go swana le di-mushroom tše di bitšwago apothecia, tšeo di bago moyeng gomme di gola go ba sclerotia yeo e sa sepelago godimo ga ditlakala tša dibjalo tše di fetetšwego (Bolton et al., 2006). Ke moka fungus e ntšha esiti ya oxalic, e lego selo sa virulence, go laola pH ya lebota la sele ya sebjalo, go kgothaletša go senyega ga ensaeme le tlhaselo ya dinama (Hegedus le Rimmer, 2005), le go gatelela go phatloga ga oxidative ga sebjalo sa moamogedi. Tshepetšo ye ya go dira esiti e fokodiša lebota la sele ya dibjalo, e fa tikologo ye e kgahlišago ya tshepedišo ye e tlwaelegilego le ye e šomago gabotse ya diensaeme tša go senya lebota la sele ya fungal (CWDEs), go dumelela twatši go fenya lepheko la mmele le go tsenelela ka gare ga ditlhalenama tša moamogedi (Marciano et al., 1983). Ge e šetše e tsentšwe, S. sclerotiorum e ntšha palo ya di-CWDE, go swana le polygalacturonase le cellulase, tšeo di nolofatšago phatlalatšo ya yona ka gare ga ditlhalenama tše di fetetšwego le go hlola necrosis ya dinama. Tšwelopele ya dišo le mepete ya hyphal e lebiša go dika tša semelo sa hlobo ye tšhweu (Hegedus le Rimmer, 2005). Go sa le bjalo, dibjalo tša moamogedi di lemoga dipaterone tša dimolekule tše di amanago le ditwatši (PAMPs) ka diamogedi tša go lemoga dipaterone (PRRs), go hlohleletša lelokelelo la ditiragalo tša go laetša tšeo mafelelong di dirago gore dikarabelo tša tšhireletšo di šome.
Go sa šetšwe mengwagasome ya maitapišo a taolo ya malwetši, tlhaelelo ya germplasm ye e lekanego ya go lwantšha e sa dutše e le ka gare ga dinawa, go swana le dibjalong tše dingwe tša kgwebo, ka lebaka la go lwantšha, go phologa le go fetofetoga ga twatši. Ka fao taolo ya malwetši e hlohla kudu gomme e nyaka leano le le kopantšwego, la mahlakore a mantši leo le akaretšago kopanyo ya mekgwa ya setšo, taolo ya diphedi, le dibolayafankase tša dikhemikhale (O'Sullivan et al., 2021). Taolo ya dikhemikhale ya hlobo ye tšhweu ke ye e šomago kudu ka lebaka la gore dibolayafankase, ge di dirišwa ka nepagalo le ka nako ye e swanetšego, di ka laola ka mo go atlegilego go phatlalala ga bolwetši, tša fokotša go ba thata ga tshwaetšo, le go fokotša tahlegelo ya poelo. Le ge go le bjalo, tšhomišo ye e feteletšego le go ithekga kudu ka dibolayafankase go ka lebiša go tšwelela ga mehuta ye e lwantšhago ya S. sclerotiorum gomme ya ama gampe diphedi tšeo e sego tša nepišo, maphelo a mmu, le boleng bja meetse (Le Cointe et al., 2016; Ceresini et al., 2024). Ka gona, go hwetša mekgwa e mengwe yeo e sa senyetšego tikologo e fetogile selo sa pele.
Polyamines (PAs), go swana le putrescine, spermidine, spermine, le cadaverine, di ka šoma bjalo ka mekgwa ye mengwe ye e holofetšago kgahlanong le ditwatši tša dibjalo tše di rwalago mmu, ka go realo di fokotša ka botlalo goba ka karolo tšhomišo ya dibolayafankase tša dikhemikhale tše kotsi (Nehela et al., 2024; Yi et al., 2024). Dibjalong tša godimo, di-PA di amega ditshepedišong tše ntši tša fisioloji go akaretšwa, eupša e sego fela, karoganyo ya disele, phapano, le karabelo ya dikgateletšego tša abiotic le biotic (Killiny le Nehela, 2020). Di ka šoma bjalo ka di-antioxidant, tša thuša go scavenge mehuta ya oksitšene ye e arabelago (ROS), di boloka homeostasis ya redox (Nehela le Killiny, 2023), di hlohleletša dikarolwana tša leabela tše di amanago le tšhireletšo (Romero et al., 2018), di laola ditsela tše di fapafapanego tša metaboliki (Nehela le Killiny, 2023), di fetola di-phytohormone tša ka gare (Nehela le Killiny, 2019), hloma kganetšo ye e hweditšwego ya tshepedišo (SAR), le go laola ditirišano tša dibjalo-twatši (Nehela le Killiny, 2020; Asija et al., 2022; Czerwoniec, 2022). Go bohlokwa go lemoga gore mekgwa ye e itšego le dikarolo tša di-PA ka tšhireletšong ya dibjalo di fapana go ya ka mehuta ya dibjalo, ditwatši, le maemo a tikologo. PA ye ntši kudu ka dibjalong e biosynthesized go tšwa go polyamine ya bohlokwa L-ornithine (Killiny le Nehela, 2020).
L-ornithine e kgatha tema ye ntši mo kgolong le tlhabollong ya dibjalo. Mohlala, dinyakišišo tša peleng di bontšhitše gore ka reise (Oryza sativa), ornithine e ka amana le go šomišwa gape ga naetrotšene (Liu et al., 2018), poelo ya reise, boleng le monkgo (Lu et al., 2020), le karabelo ya kgatelelo ya meetse (Yang et al., 2000). Go feta fao, tirišo ya exogenous ya L-ornithine e godišitše kudu kgotlelelo ya komelelo ka gare ga beet ya swikiri (Beta vulgaris) (Hussein et al., 2019) le go fokotša kgatelelo ya letswai ka gare ga onion (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu le Çavuşoǧlu, 2021) le cashew (Anacardium occidentale) . dimela (da Rocha et al., 2012). Karolo ye e ka bago gona ya L-ornithine ka tšhireletšong ya kgatelelo ya abiotic e ka ba ka lebaka la go kgatha tema ga yona ka go kgoboketša proline ka dibjalong tše di alafilwego. Go fa mohlala, dikarolwana tša leabela tše di amanago le metabolism ya proline, go swana le dikarolwana tša leabela tša ornithine delta aminotransferase (delta-OAT) le proline dehydrogenase (ProDH1 le ProDH2), di begilwe peleng gore di amega tšhireletšong ya Nicotiana benthamiana le Arabidopsis thaliana kgahlanong le mehuta ya Pseudomonas syringae yeo e sego ya moamogedi (Senthil-Kumar le M a s o r e , 2012). Ka lehlakoreng le lengwe, fungal ornithine decarboxylase (ODC) e a nyakega bakeng sa kgolo ya twatši (Singh et al., 2020). Go nepiša ODC ya Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ka go homotša dikarolwana tša leabela tše di hlohleleditšwego ke moamogedi (HIGS) e godišitše kudu go ganetša ga dibjalo tša ditamati go Fusarium wilt (Singh et al., 2020). Le ge go le bjalo, tema ye e ka bago gona ya tirišo ya ornithine ya ka ntle kgahlanong le dikgateletšo tša biotic tša go swana le phytopathogens ga se ya ithutwa gabotse. Sa bohlokwa kudu, ditlamorago tša ornithine go kganetšo ya bolwetši le ditiragalo tša dikhemikhale tša diphedi le tša fisiolotši tše di sepedišanago le tšona di sa dutše di sa hlahlobja kudu.
Go kwešiša go raragana ga tshwaetšo ya S. sclerotiorum ya dinawa go bohlokwa go tlhabollo ya maano a taolo a šomago. Thutong ye, re be re ikemišeditše go šupa tema ye e ka bago gona ya diamine L-ornithine bjalo ka selo se bohlokwa go godiša mekgwa ya tšhireletšo le go ganetša ga dibjalo tša dinawa go tshwaetšo ya Sclerotinia sclerotiorum. Re nagana gore, go tlaleletša go godiša dikarabelo tša tšhireletšo tša dibjalo tše di fetetšwego, L-ornithine gape e kgatha tema ye bohlokwa go hlokomela maemo a redox. Re šišinya gore ditlamorago tše di ka bago gona tša L-ornithine di amana le taolo ya mekgwa ya tšhireletšo ya antioxidant ya ensaeme le yeo e sego ya ensaeme le tšhitišo ya mabaka a pathogenicity/virulence ya fungal le diproteine ​​tše di amanago le yona. Mošomo wo wa go ba gabedi wa L-ornithine o e dira nkgetheng yo a holofetšago wa leano la go ya go ile la go fokotša khuetšo ya hlobo ye tšhweu le go godiša kganetšo ya dibjalo tša dinawa tše di tlwaelegilego go twatši ye ye maatla ya fungal. Dipoelo tša nyakišišo ya bjale di ka thuša ka tlhabollong ya mekgwa ya boitlhamelo, ye e sa senyetšego tikologo ya go laola hlobo ye tšhweu le go fokotša khuetšo ya yona go tšweletšo ya dinawa.
Thutong ye, mohuta wa kgwebo wo o hlaselegago gabonolo wa dinawa tše di tlwaelegilego, Giza 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3), o šomišitšwe bjalo ka sedirišwa sa diteko. Dipeu tše di phetšego gabotse di filwe ka botho ke Kgoro ya Dinyakišišo tša Legume, Setheo sa Dinyakišišo tša Dibjalo tša Tšhemo (FCRI), Senthara ya Dinyakišišo tša Temo (ARC), Egepeta. Dipeu tše hlano di ile tša bjalwa ka dipitšeng tša polasetiki (bophara bja ka gare 35 cm, botebo bja 50 cm) tšeo di tletšego ka mmu wo o fetetšwego ke S. sclerotiorum ka fase ga maemo a greenhouse (25 ± 2 °C, monola wa go lekana 75 ± 1%, 8 h seetša/16 h lefsifsi). Ka matšatši a 7-10 ka morago ga go bjala (DPS), dibjalwana di be di sesafatšwe go tlogela dibjalwana tše pedi fela tše di nago le kgolo ya go swana le matlakala a mararo a atološitšwego ka botlalo ka pitšeng ye nngwe le ye nngwe. Dibjalo ka moka tša ka pitšeng di be di nošetšwa gatee dibeke tše dingwe le tše dingwe tše pedi gomme di nontšhwa kgwedi le kgwedi ka tekanyo ye e šišinywago ya mohuta wo o filwego.
Go lokišetša 500 mg/L ya go tsepama ya L-ornithinediamine (yeo gape e tsebjago bjalo ka (+)-(S)-2,5-diaminopentanoic acid; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jeremane), 50 mg e ile ya tswakwa la mathomo ka gare ga 100 mL ya meetse a go hlwekiša a go se be le malwetši. Tharollo ya setoko e ile ya hlapološwa gomme ya šomišwa ditekolong tše di latelago. Ka boripana, lelokelelo le le tshela la ditekanyetšo tša L-ornithine (12.5, 25, 50, 75, 100, le 125 mg/L) di ile tša lekwa ka gare ga vitro. Go tlaleletša, meetse a go hlwekiša a go se be le malwetši a šomišitšwe bjalo ka taolo ye mpe (Mock) gomme sebolayafankase sa kgwebo “Rizolex-T” 50% ya phofo ye e kolobišwago (toclofos-methyl 20% + thiram 30%; KZ-Kafr El Zayat Dibolayasenyi le Khamphani ya Dikhemikhale, Kafr El Zayat, Gharbia Governorate, Egepeta) e šomišitšwe bjalo ka taolo ye botse. Sebolaya-fankase sa kgwebo “Rizolex-T” se ile sa lekwa ka gare ga vitro ka ditekanyetšo tše hlano (2, 4, 6, 8 le 10 mg/L).
Disampole tša dikutu tša dinawa tše di tlwaelegilego le diphotlwa tše di bontšhago dika tše di tlwaelegilego tša hlobo ye tšhweu (seelo sa tšharakano: 10–30%) di kgobokeditšwe go tšwa dipolaseng tša kgwebo. Le ge e le gore bontši bja didirišwa tša dibjalo tše di fetetšwego di ile tša hlaolwa ka mehuta/mohuta (mohuta wa kgwebo wo o hlaselegago gabonolo wa Giza 3), tše dingwe, kudukudu tšeo di hweditšwego go tšwa mebarakeng ya selegae, e be e le tša mehuta ye e sa tsebjego. Didirišwa tše di kgobokeditšwego tše di fetetšwego di ile tša thoma ka go bolaya ditwatši ka godimo ka tharollo ya 0.5% ya sodium hypochlorite ka metsotso ye 3, ke moka tša hlatswiwa ka makga a mmalwa ka meetse a go hlwekiša a go hloka malwetši gomme tša phumolwa ka omišwa ka pampiri ya sefa ye e se nago malwetši go tloša meetse a go feta tekano. Ditho tše di fetetšwego di ile tša segwa ka diripana tše nnyane go tšwa go dinama tša magareng (gare ga dinama tše di phetšego gabotse le tše di fetetšwego), tša godišwa godimo ga magareng ga potato dextrose agar (PDA) gomme tša bjalwa ka 25 ± 2 °C ka modikologo wa 12 h seetša/12 h lefsifsi ka matšatši a 5 go hlohleletša go bopša ga sclerotia. Mokgwa wa ntlha ya mycelial o ile wa šomišwa gape go hlwekiša di-isolate tša fungal go tšwa ditšong tše di hlakantšwego goba tše di šilafetšego. Selo sa go arolwa sa fungal ye e hlwekišitšwego se ile sa thoma ka go hlaolwa go ya ka dimelo tša sona tša sebopego sa setšo gomme ka morago sa tiišetšwa go ba S. sclerotiorum go ya ka diponagalo tša maekerosekopo. Mafelelong, di-isolate ka moka tše di hlwekišitšwego di ile tša lekwa bakeng sa pathogenicity go khalthiba ya dinawa tše di tlwaelegilego ye e hlaselegago gabonolo ya Giza 3 go fihlelela dipostulate tša Koch.
Go tlaleletša, S. sclerotiorum isolate ye e hlaselago kudu (isolate #3) e ile ya tiišetšwa gape go ya ka tatelano ya spacer ye e ngwadilwego ya ka gare (ITS) bjalo ka ge e hlalošitšwe ke White et al., 1990; Baturo-Ciesniewska et al., 2017. Ka boripana, di-isolate di ile tša godišwa ka gare ga moro wa dextrose ya ditapola (PDB) gomme tša bjalwa ka 25 ± 2 °C ka matšatši a 5-7. Ke moka mycelium ya fungal e ile ya kgoboketšwa, ya sefiwa ka lešela la tšhese, ya hlatswiwa gabedi ka meetse ao a se nago malwetši gomme ya omišwa ka pampiri ya go sefa yeo e se nago malwetši. DNA ya genomic e ile ya arolwa ka go šomiša Quick-DNATM Fungal/Bacterial Miniprep Kit (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah et al., 2022, 2024). Selete sa ITS rDNA se ile sa godišwa ka morago ka go šomiša para ye e itšego ya primer ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; bogolo bjo bo letetšwego: 540 bp) ( Baturo-Ciesniewska et al., 2017 ). Ditšweletšwa tša PCR tše di hlwekišitšwego di ile tša romelwa bakeng sa tatelano (Beijing Aoke Dingsheng Biotechnology Co., Ltd.). Tatelano ya rDNA ya ITS e ile ya latelanywa ka mahlakoreng a mabedi ka go šomiša mokgwa wa tatelano wa Sanger. Tatelano ya dipotšišo yeo e kgobokeditšwego e ile ya bapetšwa ka morago le datha ya moragorago ka go GenBank le Senthara ya Bosetšhaba ya Tshedimošo ya Theknolotši ya Diphedi (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) ka go šomiša softwere ya BLASTn. Tatelano ya dipotšišo e ile ya bapetšwa le mehuta ye mengwe ye 20 ya S. sclerotiorum/di-isolate tšeo di hweditšwego go tšwa go datha ya moragorago ka go NCBI GenBank (Table ya Tlaleletšo ya S1) ka go šomiša ClustalW ka go Molecular Evolutionary Genetics Analysis Package (MEGA-11; phetolelo 11) (Kumar et al., 2024). Tshekatsheko ya tlhagelelo e dirilwe ka go šomiša mokgwa wa kgonagalo ye kgolo le mohlala wa go tšea legato la nyukleothaete wo o ka bušetšwago morago ka nako ka kakaretšo (Nei le Kumar, 2000). Sehlare seo se nago le kgonagalo ya godimo ya log se a bontšhwa. Sehlare sa mathomo sa nyakišišo ya heuristic se kgethwa ka go kgetha sehlare seo se nago le kgonagalo ya godimo ya log magareng ga sehlare sa go kopanya moagišani (NJ) (Kumar et al., 2024) le sehlare sa palomoka ya parsimony (MP). Sehlare sa NJ se agilwe ka go šomiša matrix ya bokgole bja dipara ka dipara yeo e balwago ka go šomiša mohlala wa kakaretšo wa nako-go bušetšwa morago (Nei le Kumar, 2000).
Mošomo wa antibacterial wa L-ornithine le sebolayapaketheria “Rizolex-T” o ile wa laolwa ka vitro ka mokgwa wa phatlalatšo ya agar. Mokgwa: Tšea palo ya maleba ya tharollo ya setoko ya L-ornithine (500 mg/L) gomme o e hlakantšhe gabotse le 10 ml ya sedirišwa sa phepo ya PDA go lokišetša ditharollo tše di nago le mahloriso a mafelelo a 12.5, 25, 50, 75, 100 le 125 mg/L, ka go latelelana. Ditekanyetšo tše hlano tša sebolayafankase “Rizolex-T” (2, 4, 6, 8 le 10 mg/L) le meetse a go hlwekiša a go se be le malwetši di šomišitšwe bjalo ka taolo. Ka morago ga ge sedirišwa se tiile, polaka ya mycelial ye e sa tšwago go lokišwa ya setšo sa Sclerotinia sclerotiorum, 4 mm ka bophara, e ile ya fetišetšwa bogareng bja sebjana sa Petri gomme ya godišwa ka 25±2°C go fihlela mycelium e khupetša sebjana ka moka sa taolo sa Petri, ka morago ga fao kgolo ya fungal e ile ya rekotwa. Bala thibelo ya phesente ya kgolo ya radial ya S. sclerotiorum o šomiša tekano 1:
Teko e ile ya boeletšwa gabedi, ka diphetolelo tše tshela tša thutaphedi bakeng sa sehlopha se sengwe le se sengwe sa taolo/teko le dipitša tše hlano (dibjalo tše pedi ka pitšeng) bakeng sa phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi. Phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e ile ya sekaseka gabedi (diphetolelo tše pedi tša setegeniki) go netefatša go nepagala, go botega le go tšweletšwa gape ga dipoelo tša diteko. Go tlaleletša, tshekatsheko ya probit regression e ile ya šomišwa go bala seripa-gare sa palomoka ya go tsepama ya thibelo (IC50) le IC99 (Prentice, 1976).
Go sekaseka bokgoni bja L-ornithine ka fase ga maemo a greenhouse, diteko tše pedi tša pitša tše di latelanago di dirilwe. Ka boripana, dipitša di be di tlatšwa ka mmu wa letsopa-lehlabathe wo o sterilized (3:1) gomme tša enwa ka setšo se se sa tšwago go lokišwa sa S. sclerotiorum. Sa mathomo, se sengwe se se hlaselago kudu sa S. sclerotiorum (isolate #3) se ile sa godišwa ka go sega sclerotium e tee ka bogare, go e bea e lebeletše fase godimo ga PDA le go duša ka 25°C ka leswiswing le le sa fetogego (24 h) ka matšatši a 4 go hlohleletša kgolo ya mycelial. Dipolaki tše nne tša agar tša bophara bja 5 mm di ile tša tšewa go tšwa mošito wa go eta pele gomme tša enwa ka 100 g ya motswako wa go se be le malwetši wa korong le bran ya reise (1:1, v/v) gomme diflask ka moka di ile tša bjalwa ka 25 ± 2 °C ka fase ga modikologo wa seetša sa 12 h/12 ​​h lefsifsi ka matšatši a 5 go hlohleletša sebopego sa sclerotia. Diteng tša diflask ka moka di be di hlakantšhwa gabotse go netefatša go swana pele ga go oketša mmu. Ka morago, 100 g ya motswako wa makwapi a go dira dikolone e ile ya tlaleletšwa ka pitšeng ye nngwe le ye nngwe go netefatša gore go na le mahloriso a go se fetoge a ditwatši. Dipitša tše di entšwego di ile tša nošetšwa go dira gore kgolo ya fungal e šome gomme tša bewa ka maemong a go godiša dimela ka matšatši a 7.
Ke moka dipeu tše hlano tša mohuta wa Giza 3 di ile tša bjalwa ka pitšeng ye nngwe le ye nngwe. Bakeng sa dipitša tše di alafilwego ka L-ornithine le sebolayafankase sa Rizolex-T, dipeu tše di sterilized di ile tša thoma ka go kolobišwa diiri tše pedi ka gare ga tharollo ya meetse ya metswako ye mebedi ka kgatelelo ya mafelelo ya IC99 ya go ka ba 250 mg/L le 50 mg/L, ka go latelelana, gomme ka morago ya omišwa ka moya iri e tee pele ga go bjalwa. Ka lehlakoreng le lengwe, dipeu di be di kolobišitšwe ka meetseng a go hlwekiša a go se be le malwetši bjalo ka taolo ye mpe. Ka morago ga matšatši a 10, pele ga nošetšo ya mathomo, dibjalwana di be di sesane, go šala fela dibjalwana tše pedi tša bothakga ka pitšeng ye nngwe le ye nngwe. Go tlaleletša, go netefatša tshwaetšo ka S. sclerotiorum, dikutu tša dibjalo tša dinawa ka kgatong ye e swanago ya tlhabollo (matšatši a 10) di ile tša segwa mafelong a mabedi a go fapana ka go šomiša scalpel ye e sterilized gomme mo e ka bago 0.5 g ya motswako wa makwapi a go dira dikolone e ile ya bewa ka gare ga lebadi le lengwe le le lengwe, gomme ya latelwa ke monola wo mogolo go hlohleletša tshwaetšo le tšweletšo ya bolwetši ka dibjalong ka moka tše di entšwego. Dibjalo tša taolo di ile tša gobala ka go swana gomme palo ye e lekanago (0.5 g) ya motswako wa makwapi wo o se nago malwetši, wo o sego wa koloni e ile ya bewa ka gare ga leqeba gomme ya hlokomelwa ka fase ga monola wa godimo go ekiša tikologo ya tšweletšo ya bolwetši le go netefatša go se fetoge magareng ga dihlopha tša kalafo.
Mokgwa wa kalafo: Dibjalwana tša dinawa di ile tša nošetšwa ka 500 ml ya tharollo ya meetse ya L-ornithine (250 mg/l) goba sebolayafankase sa Rizolex-T (50 mg/l) ka go nošetša mmu, ke moka kalafo e ile ya boeletšwa gararo ka nako ya matšatši a 10. Ditaolo tšeo di alafilwego ka placebo di ile tša nošetšwa ka 500 ml ya meetse a go hlwekiša a go se be le malwetši. Dikalafo ka moka di dirilwe ka fase ga maemo a greenhouse (25 ± 2°C, 75 ± 1% ya monola wa go lekana, le photoperiod ya 8 h seetša/16 h lefsifsi). Dipitša ka moka di be di nošetšwa ka dibeke tše pedi gomme tša alafša kgwedi le kgwedi ka monontšha wa NPK wo o lekalekanego (20-20-20, ka 3.6% ya sebabole le TE microelements; Zain Seeds, Egypt) ka mahloriso a 3-4 g/l ka go gaša ka matlakala go ya ka ditšhišinyo tša mohuta wo o itšego le ditaelo tša motšweletši. Ntle le ge go boletšwe ka tsela ye nngwe, matlakala a go butšwa a atološitšwego ka botlalo (makhasi a bo 2 le a 3 go tšwa godimo) a ile a kgoboketšwa go tšwa go phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi ka 72 h ka morago ga kalafo (hpt), a homogenized, a kgoboketšwa le go bolokwa ka -80 °C bakeng sa ditshekatsheko tše dingwe go akaretšwa, eupša e sego fela, ka lefelong la histochemical localization ya ditšhupetšo tša kgatelelo ya oxidative, lipid peroxidation, enzymatic le non-enzymatic di-antioxidant le polelo ya dikarolwana tša leabela.
Boima bja tshwaetšo ya hlobo ye tšhweu bo ile bja hlahlobja beke le beke matšatši a 21 ka morago ga go enwa (dpi) ka go šomiša tekanyo ya 1-9 (Tafola ya Tlaleletšo S2) yeo e theilwego godimo ga tekanyo ya Petzoldt le Dickson (1996) yeo e fetotšwego ke Teran et al. (2006) ba bangwe. Ka boripana, dikutu le makala a dibjalo tša dinawa di ile tša hlahlobja go thoma ntlheng ya go enwa go latela tšwelopele ya dišo go bapa le di-internode le di-node. Sekgala sa lebadi go tloga ntlheng ya go enwa go ya ntlheng ya kgole kudu go bapa le kutu goba lekala se ile sa lekantšhwa ka morago gomme maemo a 1-9 a ile a abelwa go ya ka lefelo la lebadi, moo (1) e bontšhitšego gore ga go na tshwaetšo ye e bonagalago kgauswi le ntlha ya go enwa gomme (2-9) e bontšhitše go oketšega ganyenyane-ganyenyane ga bogolo bja lebadi le tšwelopele go bapa le di-node/internodes (Table ya Tlaleletšo S2). Ke moka maatla a tshwaetšo ya hlobo ye tšhweu a ile a fetošetšwa go diphesente ka go šomiša formula 2:
Go tlaleletša, lefelo leo le lego ka fase ga koba ya tšwelopele ya bolwetši (AUDPC) le ile la balwa ka go šomiša formula (Shaner le Finney, 1977), yeo e sa tšwago go fetošetšwa go bola mo gošweu ga nawa ye e tlwaelegilego (Chauhan et al., 2020) ka go šomiša tekano ya 3:
Moo Yi = bogale bja bolwetši ka nako ya ti, Yi + 1 = bogale bja bolwetši ka nako ye e latelago ti +1, ti = nako ya go ela la mathomo (ka matšatši), ti + 1 = nako ya go ela ye e latelago (ka matšatši), n = palomoka ya dintlha tša nako goba dintlha tša go lebelela. Ditekanyetšo tša kgolo ya dibjalo tša dinawa go akaretšwa botelele bja sebjalo (cm), palo ya makala ka sebjalo, le palo ya matlakala ka sebjalo di begilwe beke le beke ka matšatši a 21 ka diphetolelong ka moka tša thutaphedi.
Ka phetošong ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi, dišupommu tša matlakala (matlakala a bobedi le a boraro ao a hlabologilego ka botlalo go tšwa godimo) a kgobokeditšwe ka letšatši la 45 ka morago ga kalafo (matšatši a 15 ka morago ga kalafo ya mafelelo). Phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e be e na le dipitša tše hlano (dibjalo tše pedi ka pitša). Mo e ka bago 500 mg ya dinama tše di pšhatlagantšwego e ile ya šomišwa go ntšha dipigmente tša photosynthetic (chlorophyll a, chlorophyll b le carotenoids) ka go šomiša 80% ya acetone ka 4 °C leswiswing. Ka morago ga 24 h, disampole di ile tša centrifuged gomme supernatant e ile ya kgoboketšwa bakeng sa go ikemišetša ga chlorophyll a, chlorophyll b le dikagare tša carotenoid colorimetrically ka go šomiša UV-160A spectrophotometer (Shimadzu Corporation, Japane) go ya ka mokgwa wa (Lichtenthaler, 1987) ka go ela absorbance ka maphoto a mararo a fapanego (A470, A646 le A663 nm). Mafelelong, diteng tša dipigmente tša photosynthetic di ile tša balwa ka go šomiša difomula tše di latelago 4-6 tšeo di hlalošitšwego ke Lichtenthaler (1987).
Ka 72 h ka morago ga kalafo (hpt), matlakala (makhasi a bobedi le a boraro a hlabologilego ka botlalo go tšwa godimo) a ile a kgoboketšwa go tšwa go phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi bakeng sa go bewa ga histochemical localization ya in situ ya hydrogen peroxide (H2O2) le superoxide anion (O2•−). Phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e be e na le dipitša tše hlano (dibjalo tše pedi ka pitša). Phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e ile ya sekaseka ka diphetolelo tše pedi (diphetolelo tše pedi tša setegeniki) go netefatša go nepagala, go botega le go tšweletšwa gape ga mokgwa. H2O2 le O2•− di ile tša ikemišetša ka go šomiša 0.1% 3,3′-diaminobenzidine (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jeremane) goba tetrazolium ya nitroblue (NBT; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jeremane), ka go latelelana, go latela mekgwa yeo e hlalošitšwego ke Romero-Puertas et al. (2004) le Adam le ba bangwe. (1989) ka diphetogo tše nnyane. Bakeng sa histochemical localization ya H2O2 in situ, dipampišana di be di tsentšwe ka lefeela ka 0.1% DAB ka gare ga 10 mM Tris buffer (pH 7.8) gomme ka morago tša bjalwa ka themperetšheng ya phapoši seetšeng ka 60 min. Dipampišana di ile tša šweufatšwa ka 0.15% (v/v) TCA ka 4:1 (v/v) ethanol:chloroform (Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Egypt) gomme ka morago tša pepentšhwa seetšeng go fihlela di fifala. Ka mo go swanago, di-valve di be di tsentšwe ka lefeela ka 10 mM potasiamo phosphate buffer (pH 7.8) yeo e nago le 0.1 w/v % HBT bakeng sa go bewa ga histochemical localization ya O2•− ka situ. Dipampišana di ile tša bjalwa ka seetšeng ka themperetšheng ya phapoši ka 20 min, ke moka tša soetšwa bjalo ka ka godimo, gomme ka morago tša bonešwa go fihlela matheba a botala bja leratadima bjo bo fifetšego/violet a tšwelela. Boima bja mmala wa sephetho sa boso (bjalo ka sešupo sa H2O2) goba botalalerata-violet (bjalo ka sešupo sa O2•−) bo ile bja hlahlobja ka go šomiša phetolelo ya Fiji ya sephuthelwana sa go šoma ka diswantšho ImageJ (http://fiji.sc; e fihleletšwe ka la 7 Mopitlo 2024).
Malondialdehyde (MDA; bjalo ka leswao la lipid peroxidation) e ile ya laolwa go ya ka mokgwa wa Du le Bramlage (1992) ka diphetogo tše nnyane. Matlakala go tšwa go phetošo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi (makhasi a bobedi le a boraro ao a hlabologilego ka botlalo go tšwa godimo) a ile a kgoboketšwa 72 h ka morago ga kalafo (hpt). Phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e be e akaretša dipitša tše hlano (dibjalo tše pedi ka pitšeng). Phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e ile ya sekaseka ka diphetolelo tše pedi (diphetolelo tše pedi tša setegeniki) go netefatša go nepagala, go botega le go tšweletšwa gape ga mokgwa. Ka boripana, 0.5 g ya dinama tša matlakala a fase e ile ya šomišwa go ntšha MDA ka 20% ya esiti ya trichloroacetic (TCA; MilliporeSigma, Burlington, MA, USA) yeo e nago le 0.01% ya butylated hydroxytoluene (BHT; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Diteng tša MDA ka gare ga supernatant di ile tša bewa ka morago ka colorimetrically ka go ela absorbance ka 532 le 600 nm ka go šomiša UV-160A spectrophotometer (Shimadzu Corporation, Japane) gomme ka morago ya bontšhwa bjalo ka nmol g−1 FW.
Bakeng sa kelo ya di-antioxidant tšeo e sego tša ensaeme le tša ensaeme, matlakala (makhasi a bobedi le a boraro ao a hlabologilego ka botlalo go tšwa godimo) a ile a kgoboketšwa go tšwa go phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi ka 72 h ka morago ga kalafo (hpt). Phetolelo ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e be e na le dipitša tše hlano (dibjalo tše pedi ka pitša). Sampole ye nngwe le ye nngwe ya thutaphedi e ile ya sekaseka ka go ipoeletša (disampole tše pedi tša setegeniki). Matlakala a mabedi a ile a šilwa ka naetrotšene ya seela gomme a šomišwa thwii go laetša di-antioxidant tša ensaeme le tšeo e sego tša ensaeme, palomoka ya diesiti tša amino, diteng tša proline, polelo ya dikarolwana tša leabela, le go lekanyetša boleng bja oxalate.
Palomoka ya diphenolic tše di qhibidigago di ile tša laolwa ka go šomiša Folin-Ciocalteu reagent (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ka diphetogo tše nnyane tša mokgwa wo o hlalošitšwego ke Kahkonen et al. (1999) ba bangwe. Ka boripana, mo e ka bago 0.1 g ya dinama tša matlakala a homogenized e ile ya ntšhwa ka 20 ml ya 80% ya methanol leswiswing ka 24 h gomme supernatant e ile ya kgoboketšwa ka morago ga centrifugation. 0.1 ml ya setsopolwa sa sampole e ile ya hlakantšhwa le 0.5 ml ya Folin-Ciocalteu reagent (10%), ya šišinywa ka 30 s gomme ya tlogelwa leswiswing ka 5 min. Ka morago ga moo 0.5 ml ya tharollo ya 20% ya sodium carbonate (Na2CO3; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies Company, Cairo, Egypt) e ile ya tlaleletšwa go tube ye nngwe le ye nngwe, ya hlakantšhwa gabotse gomme ya bjalwa ka themperetšheng ya phapoši leswiswing ka 1 h. Ka morago ga go duša, go monya ga motswako wa karabelo go ile gwa lekantšhwa ka 765 nm ka go šomiša UV-160A spectrophotometer (Shimadzu Corporation, Japane). Mahloriso a palomoka ya diphenol tše di qhibidigago ka gare ga ditsopolwa tša sampole e ile ya laolwa ka go šomiša koba ya go lekanya esiti ya gallic (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) gomme ya bontšhwa bjalo ka dimiligrama tša esiti ya gallic ye e lekanago ka grama ya boima bjo bo foreše (mg GAE g-1 ya boima bjo bo foreše).
Palomoka ya diteng tša flavonoid ye e qhibidigago e ile ya laolwa go ya ka mokgwa wa Djeridane et al. (2006) ka diphetogo tše nnyane. Ka boripana, 0.3 ml ya setsopolwa sa methanol se se lego ka mo godimo e ile ya hlakantšhwa le 0.3 ml ya tharollo ya 5% ya aluminiamo chloride (AlCl3; Fisher Scientific, Hampton, NH, USA), ya hlohleletšwa ka maatla gomme ya bjalwa ka themperetšheng ya phapoši ka 5 min, ya latelwa ke go tlaleletšwa ga 0.3 ml ya tharollo ya 10% ya potasiamo acetate (Al-Gomhoria Dihlare le Ditlabakelo tša Kalafo, Cairo, Egepeta), di hlakantšwe ka botlalo le go bjalwa ka themperetšheng ya phapoši ka 30 min lefifing. Ka morago ga go duša, go monya ga motswako wa karabelo go ile gwa lekantšhwa ka 430 nm ka go šomiša UV-160A spectrophotometer (Shimadzu Corporation, Japane). Mahloriso a palomoka ya di-flavonoid tše di qhibidigago ka gare ga ditsopolwa tša mohlala o ile wa laolwa ka go šomiša koba ya go lekanya rutin (TCI America, Portland, OR, USA) gomme ka morago ya bontšhwa bjalo ka dimiligrama tša rutin ye e lekanago ka grama ya boima bjo bo foreše (mg RE g-1 boima bjo bo foreše).
Palomoka ya diteng tša amino acid ya mahala ya matlakala a dinawa e ile ya laolwa ka go šomiša reagent ya ninhydrin ye e fetotšwego (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) ye e theilwego godimo ga mokgwa wo o šišintšwego ke Yokoyama le Hiramatsu (2003) gomme ya fetošwa ke Sun et al. (2006) ba bangwe. Ka boripana, 0.1 g ya dinama tše di šitšwego e ile ya ntšhwa ka pH 5.4 buffer, gomme 200 μL ya supernatant e ile ya arabela ka 200 μL ya ninhydrin (2%) le 200 μL ya pyridine (10%; Spectrum Chemical, New Brunswick, NJ, USA), ya bjalwa ka gare ga bate ya meetse a go bela ka 30 min, ke moka ya fodišwa gomme ya lekantšhwa ka 580 nm ka go šomiša spectrophotometer ya UV-160A (Shimadzu Corporation, Japane). Ka lehlakoreng le lengwe, proline e ile ya laolwa ka mokgwa wa Bates (Bates et al., 1973). Proline e ile ya ntšhwa ka 3% ya esiti ya sulfosalicylic (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) gomme ka morago ga go centrifugation, 0.5 ml ya supernatant e ile ya hlakantšhwa le 1 ml ya glacial acetic acid (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) le ninhydrin reagent, ya bjalwa ka 90°C ka 45 min, ya fodišwa le go lekantšhwa ka 520 nm ka go šomiša spectrophotometer ye e swanago le ya ka godimo. Palomoka ya diaminoesiti tša mahala le proline ka gare ga ditsopolwa tša matlakala di ile tša laolwa ka go šomiša dikhube tša go lekanya glycine le proline (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), ka go latelelana, gomme tša bontšhwa bjalo ka mg/g ya boima bjo bo foreše.
Go bona mošomo wa ensaeme wa diensaeme tša antioxidant, mo e ka bago 500 mg ya dinama tše di homogenized e ile ya ntšhwa ka 3 ml ya 50 mM Tris buffer (pH 7.8) yeo e nago le 1 mM EDTA-Na2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) le 7.5% ya polyvinylpyrrolidone (PVP; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), centrifuged ka 10,000 × g bakeng sa 20 mets tlas'a refrigeration (4 ° C), 'me supernatant (setsopolwa sa ensaeme e tala) ile bokella (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023). Catalase (CAT) e ile ya arabela ka morago ka 2 ml ya 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.5; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) le 100 μl ya tharollo ya 269 mM H2O2 go bona mošomo wa yona wa ensaeme go ya ka mokgwa wa Aebi (1984) ka diphetogo tše nnyane (El-Nagar et al., 2023; Osman le ba bangwe, 2023). Mošomo wa ensaeme wa peroxidase ye e ithekgilego ka guaiacol (POX) o ile wa laolwa ka go šomiša mokgwa wa Harrach et al. (2009) (2009) ba bangwe. (2008) ka diphetogo tše nnyane (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023) le mošomo wa enzymatic wa polyphenol oxidase (PPO) o ile wa ikemišetša ka morago ga karabelo le 2.2 ml ya 100 mM sodium phosphate buffer (pH 6.0), 100 μl ya guaiacol (TCI dikhemikhale, Portland, OR, USA) le 100 μl ya 12 mM H2O2. Mokgwa o ile wa fetošwa gannyane go tšwa go (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023). Teko e dirilwe ka morago ga karabelo ka 3 ml ya tharollo ya catechol (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) (0.01 M) yeo e sa tšwago go lokišetša ka gare ga 0.1 M phosphate buffer (pH 6.0). Mošomo wa CAT o ile wa lekantšhwa ka go hlokomela go bola ga H2O2 ka 240 nm (A240), mošomo wa POX o ile wa lekantšhwa ka go hlokomela koketšego ya go monya ka 436 nm (A436), gomme mošomo wa PPO o ile wa lekantšhwa ka go rekota diphetogophetogo tša go monya ka 495 nm (A495) s e nngwe le e nngwe e 30 ka metsotso e 3 ka go diriša UV-160A spectrophotometer (Shimadzu, Japane) ya go ela (Shimadzu, Japane).
RT-PCR ya nako ya nnete e ile ya šomišwa go utolla maemo a go ngwalwa ga dikarolwana tše tharo tša leabela tše di amanago le antioxidant, go akaretšwa peroxisomal catalase (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), superoxide dismutase (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1), le glutathione reductase (PvGR; GenBank Accession No.. KY195009.1), ka matlakaleng a dinawa (makhasi a bobedi le a boraro a hlabologilego ka botlalo go tšwa godimo) 72 h ka morago ga kalafo ya mafelelo. Ka boripana, RNA e ile ya arolwa ka go šomiša Simply P Total RNA Extraction Kit (Cat. No. BSC52S1; BioFlux, Biori Technology, China) go ya ka protocol ya motšweletši. Ka morago, cDNA e ile ya hlangwa ka go šomiša TOP scriptTM cDNA Synthesis Kit go ya ka ditaelo tša motšweletši. Tatelano ya primer ya dikarolwana tša leabela tše tharo tše di lego ka mo godimo e lokeleditšwe go Lenaneo la Tlaleletšo la S3. PvActin-3 (GenBank accession number: XM_068616709.1) e ile ya šomišwa bjalo ka lephelo la go hlokomela ntlo gomme polelo ya dikarolwana tša leabela ya go lekana e ile ya balwa ka go šomiša mokgwa wa 2-ΔΔCT (Livak le Schmittgen, 2001). Go tsepama ga actin ka fase ga kgatelelo ya biotic (tirišano ye e sa sepelelanego magareng ga dinawa tše di tlwaelegilego le fungus ya anthracnose Colletotrichum lindemuthiaanum) le kgatelelo ya abiotic (komelelo, letswai, themperetšha ya fase) e bontšhitšwe (Borges et al., 2012).
Re qalong re ile ra etsa genome-ka bophara ka silico and analysis ya oxaloacetate acetylhydrolase (OAH) diprotheine ka S. sclerotiorum sebelisa protheine-proteine ​​BLAST sesebediswa (BLASTp 2.15.0 +) (Altschul et al., 1997, 2005). Ka boripana, re šomišitše OAH go tšwa go Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; taxide: 1191702; nomoro ya go tsenela ya GenBank XP_040799428.1; diaminoesiti tše 342) le Penicillium lagena (PlOAH; taxide: 94218; nomoro ya go tsenela ya GenBank XP_056833920.1; BLASTp e dirilwe kgahlanong le datha ya genome ya S. sclerotiorum yeo e sa tšwago go hwetšagala ka go GenBank mo wepsaeteng ya Setsi sa Bosetšhaba sa Tshedimošo ya Theknolotši ya Diphedi (NCBI), http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/.
Go tlaleletša, lephelo la OAH leo le boletšwego e sa le pele go tšwa go S. sclerotiorum (SsOAH) le tshekatsheko ya tlhagelelo le sehlare sa phylogenetic sa AfOAH go tšwa go A. fijiensis CBS 313.89 le PlOAH go tšwa go P. lagena di ile tša akanywa ka go šomiša mokgwa wa kgonagalo ye kgolo go MEGA11 (Tamura et al., 2021) le mohlala wo o theilwego godimo ga matrix wa JTT (Jones et al., 1992) le ba bangwe. Sehlare sa phylogenetic se ile sa kopanywa le tshekatsheko ya go logaganya tše ntši ya tatelano ya proteine ​​ya dikarolwana ka moka tša leabela tša OAH tšeo di boletšwego e sa le pele (SsOAH) go tšwa go S. sclerotiorum le tatelano ya dipotšišo ka go šomiša Sedirišwa sa go logaganya seo se Theilwego go Thibelo (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/re_cobalt.cgi) (Papadopoulos le Agarwala, 2007). Go tlaleletša, tatelano ya amino acid ye e swanago gabotse ya SsOAH go tšwa go S. sclerotiorum e ile ya logaganywa le tatelano ya dipotšišo (AfOAH le PlOAH) (Larkin et al., 2007) ka go šomiša ClustalW (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw), gomme dilete tše di bolokilwego ka go logaganya di ile tša bonwa ka leihlo la kgopolo ka go šomiša sedirišwa sa ESPript (phetolelo 3.0; https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/tšhupamabaka.php).
Go feta fao, didomene tša moemedi wa mošomo tšeo di boletšwego e sa le pele le mafelo a bolokilwego a S. sclerotiorum SsOAH di ile tša arolwa ka tirišano ka malapa a go fapana ka go šomiša sedirišwa sa InterPro (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) (Blum et al., 2021). Mafelelong, go dira mohlala wa sebopego sa mahlakore a mararo (3D) sa S. sclerotiorum SsOAH yeo e boletšwego e sa le pele go dirilwe ka go šomiša Entšene ya Temogo ya Protein Homology/Analogy (Phyre2 server version 2.0; http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (Kelley et al., 2015) gomme ya netefatšwa ka go šomiša seva ya SWISS-MODEL (https://swissmodel.expasy.org/) (Biasini et al., 2014). Dibopego tša mahlakore a mararo tšeo di boletšwego e sa le pele (sebopego sa PDB) di ile tša bonwa ka leihlo la kgopolo ka tirišano ka go šomiša sephuthelwana sa UCSF-Chimera (phetolelo 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/ ) (Pettersen et al., 2004).
Boleng bja nako ya nnete ya fluorescence PCR e ile ya šomišwa go laetša maemo a transcriptional a oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH; nomoro ya go tsenela ya GenBank: XM_001590428.1) ka gare ga mycelia ya Sclerotinia sclerotiorum. Ka boripana, S. sclerotiorum e ile ya enwa ka gare ga flask yeo e nago le PDB gomme ya bewa ka gare ga incubator ya go šišinya (mohlala: I2400, New Brunswick Scientific Co., Edison, NJ, USA) ka 25 ± 2 °C ka 24 h ka 150 rpm le ka leswiswing le le sa fetogego (24 h) go hlohleletša kgolo ya mycelial. Ka morago ga moo, disele di ile tša alafša ka L-ornithine le sebolaya-fankase sa Rizolex-T ka ditekanyetšo tša mafelelo tša IC50 (e ka bago 40 le 3.2 mg/L, ka go latelelana) gomme ka morago tša godišwa ka 24 h ye nngwe ka fase ga maemo a go swana. Ka morago ga go duša, ditšo di ile tša centrifuged ka 2500 rpm ka 5 min gomme supernatant (fungal mycelium) e ile ya kgoboketšwa bakeng sa tshekatsheko ya polelo ya dikarolwana tša leabela. Ka mo go swanago, mycelium ya fungal e ile ya kgoboketšwa ka 0, 24, 48, 72, 96, le 120 h ka morago ga tshwaetšo go tšwa go dibjalo tše di fetetšwego tšeo di bego di bopile mouta wo mošweu le mycelium ya kgapetla godimo ga ditlhalenama tše di fetetšwego. RNA e ile ya ntšhwa go tšwa go mycelium ya fungal gomme ka morago cDNA ya hlangwa bjalo ka ge go hlalositšwe ka mo godimo. Tatelano ya primer ya SsOAH e lokeleditšwe go Lenaneo la Tlaleletšo la S3. SsActin (GenBank accession number: XM_001589919.1) e ile ya šomišwa bjalo ka lephelo la go hlokomela ntlo, gomme polelo ya dikarolwana tša leabela tša go lekana e ile ya balwa ka go šomiša mokgwa wa 2-ΔΔCT (Livak le Schmittgen, 2001).
Esiti ya oxalic e ile ya laolwa ka gare ga moro wa dextrose ya ditapola (PDB) le dišupommu tše di nago le twatši ya fungal Sclerotinia sclerotiorum go ya ka mokgwa wa Xu le Zhang (2000) ka diphetogo tše nnyane. Ka boripana, di-isolate tša S. sclerotiorum di ile tša enwa ka gare ga diflask tšeo di nago le PDB gomme ka morago tša godišwa ka gare ga incubator ya go šišinya (mohlala I2400, New Brunswick Scientific Co., Edison, NJ, USA) ka 150 rpm ka 25 ± 2 °C ka matšatši a 3-5 ka leswiswing le le sa fetogego (24 h) go hlohleletša kgolo ya mycelial. Ka morago ga go duša, setšo sa fungal se ile sa thoma ka go sefiwa ka pampiri ya go sefa ya Whatman #1 gomme ka morago ya centrifuged ka 2500 rpm ka 5 min go tloša mycelium ya mašaledi. Supernatant e ile ya kgoboketšwa gomme ya bolokwa ka 4°C bakeng sa boikemišetšo bjo bongwe bja boleng bja oxalate. Bakeng sa go lokišetša dišupommu tša dibjalo, mo e ka bago 0.1 g ya dikarolwana tša dinama tša dibjalo di ile tša ntšhwa gararo ka meetse a distilled (2 ml nako ye nngwe le ye nngwe). Disampole di ile tša centrifuged ka 2500 rpm ka 5 min, supernatant e ile ya sefiwa ka go oma ka pampiri ya go sefa ya Whatman No. 1 gomme ya kgoboketšwa bakeng sa tshekatsheko ye nngwe.
Bakeng sa tshekatsheko ya boleng bja esiti ya oxalic, motswako wa karabelo o ile wa lokišetša ka gare ga tube ya go thibela khalase ka tatelano ye e latelago: 0.2 ml ya sampole (goba PDB culture filtrate goba oxalic acid standard solution), 0.11 ml ya bromophenol blue (BPB, 1 mM; Fisher Chemical, Pittsburgh, PA, USA), 0.198 ml ya 1 M sulfuric acid (H2SO4; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Egypt) le 0.176 ml ya 100 mM potasiamo dichromate (K2Cr2O7; TCI dikhemikhale, Portland, OR, USA), gomme ka morago tharollo e ile ya hlapološwa go fihla go 4.8 ml ka meetse a distilled, ya hlapološwa ka maatla gomme ya bewa ka pela ka meetseng a 60 °C go hlapa. Ka morago ga 10 min, karabelo e ile ya emišwa ka go tlaleletša ka 0.5 ml ya tharollo ya sodium hydroxide (NaOH; 0.75 M). Absorbance (A600) ya motswako wa karabelo e ile ya lekantšhwa ka 600 nm ka go šomiša UV-160 spectrophotometer (Shimadzu Corporation, Japane). PDB le meetse a distilled di šomišitšwe bjalo ka taolo ya go lekanyetša boleng bja difiltara tša setšo le dišupommu tša dibjalo, ka go latelelana. Ditekanyetšo tša esiti ya oxalic ka gare ga difiltara tša setšo, tšeo di bontšhitšwego bjalo ka di-microgram tša esiti ya oxalic ka mililitara ya magareng ya PDB (μg.mL−1), le ka gare ga ditsopolwa tša matlakala, tšeo di bontšhitšwego bjalo ka di-microgram tša esiti ya oxalic ka grama ya boima bjo bo foreše (μg.g−1 FW), di ile tša laolwa ka go šomiša koba ya go lekanya esiti ya oxalic (Thermo Fisher Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA).
Thutong ka moka, diteko ka moka di hlamilwe ka tlhamo ye e sa rulaganyetšwago ka botlalo (CRD) ka diphetolelo tše tshela tša thutaphedi ka kalafo le dipitša tše hlano ka phetolelo ya thutaphedi (dibjalo tše pedi ka pitšeng) ntle le ge go boletšwe ka tsela ye nngwe. Diphetolelo tša thutaphedi di ile tša sekaseka ka diphetolelo tše pedi (diphetolelo tše pedi tša setegeniki). Diphetolelo tša sethekniki di ile tša šomišwa go lekola go tšweletšwa gape ga teko ye e swanago eupša ga se tša šomišwa tshekatshekong ya dipalopalo go efoga diphetolelo tša maaka. Data ba ile ba dipalopalo sekaseka sebelisa and analysis ya phapang (ANOVA) lateloa ke Tukey-Kramer ka botšepehi phapang bohlokoa (HSD) teko (p ≤ 0.05). Bakeng sa diteko tša ka gare ga vitro, dikelo tša IC50 le IC99 di ile tša balwa ka go šomiša mohlala wa probit gomme dikgao tša boitshepo tša 95% di ile tša balwa.
Palomoka ya di-isolate tše nne di kgobokeditšwe go tšwa mašemong a go fapana a dinawa tša soya ka El Ghabiya Governorate, Egypt. Ka gare ga PDA, di-isolate ka moka di tšweleditše mycelium ye tšhweu ya tranelate yeo ka pela e ilego ya fetoga ye tšhweu ya cottony (Setshwantšho 1A) gomme ka morago ya ba beige goba sootho mo legatong la sclerotium. Sclerotia gantšhi ke tše di kitimago, tše ntsho, tša nkgokolo goba tše di sa laolegego ka sebopego, 5.2 go ya go 7.7 mm ka botelele le 3.4 go ya go 5.3 mm ka bophara (Setshwantšho 1B). Le ge e le gore di-isolate tše nne di ile tša hlabolla mohlala wa ka thoko wa sclerotia mo ntlheng ya sedirišwa sa setšo ka morago ga matšatši a 10-12 a go duša ka 25 ± 2 °C (Fig. 1A), palo ya sclerotia ka poleiti e be e fapane kudu gare ga bona (P <0.001), ka isolate 3 yeo e nago le palo ye e phagamego kudu ya sclerotia (32.33 ± 1.53 sclerotia ka poleiti ya Setshwantsho 1C). Ka mo go swanago, isolate #3 e tšweleditše esiti ya oxalic ye ntši ka PDB go feta di-isolate tše dingwe (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; Seswantšho 1D). Isolate #3 e bontšhitše dimelo tše di tlwaelegilego tša sebopego le tša microscopic tša fungus ya phytopathogenic Sclerotinia sclerotiorum. Mohlala, go PDA, dikoloni tša isolate #3 di ile tša gola ka lebelo, di be di le tše tšhweu tša tranelate (Setshwantšho 1A), beige ya go bušetša morago goba ye bofefo ya salmon yellow-brown, gomme di nyaka matšatši a 6-7 ka 25 ± 2°C go khupetša ka botlalo bokagodimo bja poleiti ya bophara bja 9 cm. Go ya ka dimelo tša sebopego le tša microscopic tše di lego ka mo godimo, isolate #3 e ile ya hlaolwa bjalo ka Sclerotinia sclerotiorum.
Seswantšho 1. Dika le pathogenicity ya S. sclerotiorum isolates go tšwa go dibjalo tša dinawa tše di tlwaelegilego. (A) Kgolo ya mycelial ya di-isolate tše nne tša S. sclerotiorum godimo ga sedirišwa sa PDA, (B) sclerotia ya di-isolate tše nne tša S. sclerotiorum, (C) palo ya sclerotia (ka poleiti), (D) secretion ya esiti ya oxalic godimo ga sedirišwa sa PDB (μg.mL−1), le (E) bogale bja bolwetši (%) bja di-isolate tše nne tša S. sclerotiorum go legume ya kgwebo ye e amogelegago khalthiba Giza 3 ka tlase ga maemo a greenhouse. Ditekanyetšo emela magareng ± SD ya diphetolelo tše hlano tša thutaphedi (n = 5). Ditlhaka tše di fapanego di bontšha diphapano tše bohlokwa tša dipalopalo magareng ga dikalafo (p <0.05). (F–H) Dika tše di tlwaelegilego tša hlobo ye tšhweu di tšweletše godimo ga dikutu tša ka godimo ga mmu le disiliki, ka go latelelana, matšatši a 10 ka morago ga go enwa ka isolate #3 (dpi). (I) Tshekatsheko ya tlhagelelo ya selete sa ka gare sa sekgoba se se ngwadilwego (ITS) sa S. sclerotiorum isolate #3 e dirilwe ka go šomiša mokgwa wa kgonagalo ye kgolo gomme ya bapetšwa le di-isolate tše 20 tša tšhupetšo/mehuta yeo e hweditšwego go tšwa go polokelo ya tshedimošo ya Setsi sa Bosetšhaba sa Tshedimošo ya Theknolotši ya Diphedi (NCBI) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Dipalo tša ka godimo ga mela ya go hlopha di laetša khupetšo ya selete (%), gomme dinomoro tše di lego ka fase ga mela ya go hlopha di laetša botelele bja makala.
Go feta fao, go tiišetša pathogenicity, di-isolate tše nne tše di hweditšwego tša S. sclerotiorum di šomišitšwe go entela khalthiba ya dinawa tša kgwebo ye e hlaselegago gabonolo ya Giza 3 ka fase ga maemo a greenhouse, yeo e sepelelanago le dipostulates tša Koch (Fig. 1E). Le ge e le gore di-isolate ka moka tša fungal tše di hweditšwego e be e le pathogenic gomme di be di ka fetetša nawa ye tala (cv. Giza 3), go hlola dika tše di tlwaelegilego tša hlobo ye tšhweu dikarolong ka moka tša ka godimo ga mmu (Fig. 1F), kudukudu godimo ga dikutu (Fig. 1G) le diphotsing (Fig. 1H) ka matšatši a 10 ka morago ga go enwa (dpi), isolate 3 e be e le isolate ye bogale kudu ka ditekong tše pedi tše di ikemetšego. Isolate 3 e bile le bogale bja bolwetši bjo bo phagamego kudu (%) go dibjalo tša dinawa (24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, le 76.7 ± 3.1 ka matšatši a 7, 14, le 21 ka morago ga tshwaetšo, ka go latelelana; Seswantšho 1F).
Go hlaolwa ga S. sclerotiorum isolate #3 yeo e hlaselago kudu go ile gwa tiišetšwa gape go ya ka tatelano ya spacer ye e ngwadilwego ya ka gare (ITS) (Fig. 1I). Tshekatsheko ya phylogenetic magareng ga isolate #3 le 20 ya di-isolate/mehuta ya tšhupetšo e bontšhitše go swana mo go phagamego (>99%) magareng ga tšona. Go bohlokwa go lemoga gore S. sclerotiorum isolate #3 (533 bp) e na le go swana mo go phagamego le American S. sclerotiorum isolate LPM36 yeo e arotšwego go tšwa go dipeu tša dierekisi tše di omilego (nomoro ya go tsenela ya GenBank MK896659.1; 540 bp) le isolate ya S. sclerotiorum ya China YKY211 (nomoro ya phihlelelo ya GenBank OR206374.1;548 bp), yeo e hlolago go bola ga kutu ya violet (Matthiola incana), tšeo ka moka di hlophišitšwego ka thoko ka godimo ga dendrogram (Setshwantšho 1I). Tatelano ye mpsha e beilwe ka gare ga polokelo ya tshedimošo ya NCBI gomme e reeletšwe ka leina la “Sclerotinia sclerotiorum – arola YN-25” (nomoro ya go tsenela ya GenBank PV202792). Go ka bonwa gore isolate 3 ke isolate yeo e hlaselago kudu; ka fao, isolate ye e ile ya kgethwa go ithutwa ditekolong ka moka tše di latelago.
Mošomo wa antibacterial wa diamine L-ornithine (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jeremane) ka mahloriso a go fapana (12.5, 25, 50, 75, 100 le 125 mg/L) kgahlanong le S. sclerotiorum isolate 3 o ile wa nyakišišwa ka vitro. Go a lemogwa gore L-ornithine e dirile phello ya antibacterial gomme ganyenyane-ganyenyane ya thibela kgolo ya radial ya S. sclerotiorum hyphae ka mokgwa wo o ithekgilego ka tekanyo (Setshwantšho 2A, B). Ka mahloriso a godimodimo ao a lekilwego (125 mg/L), L-ornithine e bontšhitše seelo sa godimodimo sa thibelo ya kgolo ya mycelial (99.62 ± 0.27%; Seswantšho 2B), seo se bego se lekana le sebolayafankase sa kgwebo sa Rizolex-T (seelo sa thibelo 99.45 ± 0.39%; Seswantšho 2C) ka mahloriso a godimodimo ao a lekilwego (10 mg/L), e laetšago go swana go šoma gabotse.
Seswantšho 2. Mošomo wa antibacterial wa ka gare ga vitro wa L-ornithine kgahlanong le Sclerotinia sclerotiorum. (A) Papiso ya mošomo wa antibacterial wa ditekanyetšo tše di fapanego tša L-ornithine kgahlanong le S. sclerotiorum le sebolayafankase sa kgwebo sa Rizolex-T (10 mg/L). (B, C) Sekgahla sa thibelo (%) sa kgolo ya mycelial ya S. sclerotiorum ka morago ga kalafo ka mahloriso a go fapana a L-ornithine (12.5, 25, 50, 75, 100 le 125 mg/L) goba Rizolex-T (2, 4, 6, 8 le 10 mg/L), ka go latelelana. Ditekanyetšo emela magareng ± SD ya diphetolelo tše hlano tša thutaphedi (n = 5). Ditlhaka tše di fapanego di laetša diphapano tša dipalopalo magareng ga dikalafo (p <0.05). (D, E) Probit mohlala regression and analysis ya L-ornithine le kgwebo fungicide Rizolex-T, ka ho latellana. Mola wa go boela morago wa mohlala wa probit o bontšhwa bjalo ka mola wo mopududu wo o tiilego, gomme sekgoba sa boitshepo (95%) se bontšhwa bjalo ka mola wo mohwibidu wo o kgaotšwego.
Go tlaleletša, tshekatsheko ya probit regression e dirilwe gomme diploto tše di swanetšego di bontšhitšwe go Lenaneo 1 le Ditshwantšho 2D,E. Ka boripana, boleng bja setshekamelo bjo bo amogelegago (y = 2.92x − 4.67) le dipalopalo tše bohlokwa tše di amanago le tšona (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 le p <0.0001; Seswantšho 2D) tša L-ornithine di bontšhitše mošomo wo o oketšegilego wa antifungal kgahlanong le S. sclerotiorum ge e bapetšwa le sebolayafankase sa kgwebo Rizolex-T (y = 1,96x − 0,99, Cox & Snell R2 = 0,1242, Nagelkerke R2 = 0,1708 le p <0,0001) (Table 1).
Lenaneo 1. Ditekanyetšo tša seripa-gare sa palomoka ya go tsepama ga thibelo (IC50) le IC99 (mg/l) ya L-ornithine le sebolaya-fankase sa kgwebo “Rizolex-T” kgahlanong le S. sclerotiorum.
Ka kakaretšo, L-ornithine (250 mg/L) e fokoditše kudu tlhabollo le go ba thata ga hlobo ye tšhweu go dibjalo tša dinawa tše di tlwaelegilego tše di alafilwego ge di bapetšwa le dibjalo tše di sa alafšego tše di fetetšwego ke S. sclerotiorum (taolo; Seswantšho 3A). Ka boripana, le ge e le gore boima bja bolwetši bja dibjalo tša taolo tše di fetetšwego tšeo di sa alafšego bo ile bja oketšega ganyenyane-ganyenyane (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, le 92.33 ± 3.06%), L-ornithine e fokoditše kudu bogale bja bolwetši (%) go ralala le teko (8.97 ± 0.15, 18.00 ± 1.00, le 26.36 ± 3.07) ka 7, 14, le 21 matsatsi a ka mor'a kalafo (dpt), ka ho latellana (Figure 3A). Ka go swana, ge dibjalo tša dinawa tše di fetetšwego ke S. sclerotiorum di be di alafša ka 250 mg/L L-ornithine, lefelo ka fase ga koba ya tšwelopele ya bolwetši (AUDPC) le ile la fokotšega go tšwa go 1274.33 ± 33.13 ka taolo ye e sa alafšwago go ya go 281.03 ± 7.95, yeo e bego e le fase gannyane go feta ya taolo ye botse ya 50 mg/L Rizolex-T sebolayafankase (183,61 ± 7,71; Setšoantšo. 3B). Tshekamelo e swanago e ile ya bonwa tekong ya bobedi.
Fig. 3. Phello ya tirišo ya exogenous ya L-ornithine go tšwetšopele ya go bola mo go tšhweu ga nawa ye e tlwaelegilego ye e hlotšwego ke Sclerotinia sclerotiorum ka fase ga maemo a greenhouse. (A) Koba ya tšwelopele ya bolwetši ya hlobo ye tšhweu ya nawa ye e tlwaelegilego ka morago ga kalafo ka 250 mg/L L-ornithine. (B) Lefelo ka fase ga koba ya tšwelopele ya bolwetši (AUDPC) ya hlobo ye tšhweu ya nawa ye e tlwaelegilego ka morago ga kalafo ka L-ornithine. Ditekanyetšo emela magareng ± SD ya diphetolelo tše hlano tša thutaphedi (n = 5). Ditlhaka tše di fapanego di laetša diphapano tše bohlokwa tša dipalopalo magareng ga dikalafo (p <0.05).
Tšhomišo ya exogenous ya 250 mg/L L-ornithine e okeditše bophagamo bja sebjalo ganyenyane-ganyenyane (Fig. 4A), palo ya makala ka sebjalo (Fig. 4B), le palo ya matlakala ka sebjalo (Fig. 4C) ka morago ga matšatši a 42. Le ge sebolaya-fankase sa kgwebo Rizolex-T (50 mg/L) se bile le mafelelo a magolo kudu go ditekanyetšo ka moka tša phepo tšeo di ithutilwego, tirišo ya exogenous ya 250 mg/L L-ornithine e bile le mafelelo a bobedi a magolo ge e bapetšwa le taolo yeo e sa alafšego (Figs. 4A–C). Ka lehlakoreng le lengwe, kalafo ya L-ornithine e be e se na mafelelo a magolo go diteng tša dipigmente tša photosynthetic chlorophyll a (Fig. 4D) le chlorophyll b (Fig. 4E), eupša e okeditše gannyane palomoka ya diteng tša carotenoid (0.56 ± 0.03 mg/g fr wt) ge e bapetšwa le taolo ye mpe (0.44 ± 0.02 mg/g fr wt) le taolo e ntle (0.46 ± 0.02 mg, / g fr wt; Setšoantšo. 4F). Ka kakaretšo, dipoelo tše di laetša gore L-ornithine ga se phytotoxic go dinawa tše di alafilwego gomme di ka ba tša hlohleletša kgolo ya tšona.
Seh. 4. Phello ya tirišo ya exogenous L-ornithine go dimelo tša kgolo le dipigmente tša photosynthetic tša matlakala a dinawa ao a fetetšwego ke Sclerotinia sclerotiorum ka fase ga maemo a greenhouse. (A) Bophagamo bja sebjalo (cm), (B) Palo ya makala ka sebjalo, (C) Palo ya matlakala ka sebjalo, (D) Diteng tša chlorophyll a (mg g-1 fr wt), (E) Diteng tša chlorophyll b (mg g-1 fr wt), (F) Palomoka ya diteng tša carotenoid (mg g-1 fr wt). Ditekanyetšo ke magareng ± SD ya diphetolelo tše hlano tša thutaphedi (n = 5). Ditlhaka tše di fapanego di bontšha diphapano tše bohlokwa tša dipalopalo magareng ga dikalafo (p <0.05).
In situ histochemical localization ya mehuta ya oksitšene e arabelago (ROS; e bontšhitšwe bjalo ka hydrogen peroxide [H2O2]) le radicals ya mahala (e bontšhitšwego bjalo ka di-anion tša superoxide [O2•−]) e utollotše gore tirišo ya exogenous ya L-ornithine (250 mg/L) e fokoditše kudu go kgoboketšwa ga H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW; Seh. 5A) le O2•− (32.69 ± 8.56 nmol.g−1 FW; Seh. 5B) ge di bapetšwa le go kgoboketšwa ga dibjalo tše di fetetšwego ka bobedi tšeo di sa alafšego (173.31 ± 12.06 le 149.35 ± 7.94 nmol.g−1 FW, ka go latelelana) le dimela tšeo di alafilwego ka 50 mg/L ya sebolaya-fankase sa kgwebo Rizolex-T (170.12 ± 9.50 le 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt, ka ho latellana) ka 72 h. Maemo a godimo a H2O2 le O2•− a kgobokeditšwe ka fase ga hpt (Fig. 5A, B). Ka mo go swanago, tshekatsheko ya malondialdehyde (MDA) ye e theilwego go TCA e bontšhitše gore dibjalo tša dinawa tše di fetetšwego ke S. sclerotiorum di kgobokeditše maemo a godimo a MDA (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) ka matlakaleng a tšona (Fig. 5C). Le ge go le bjalo, tirišo ya exogenous ya L-ornithine e fokoditše kudu peroxidation ya lipid bjalo ka ge go hlatsetšwe ke go fokotšega ga diteng tša MDA ka dibjalong tše di alafilwego (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt).
Seh. 5. Phello ya tirišo ya exogenous L-ornithine go maswao a magolo a kgateletšego ya oxidative le mekgwa ya tšhireletšo ya antioxidant yeo e sego ya ensaeme ka matlakaleng a dinawa ao a fetetšwego ke S. sclerotiorum ka 72 h ka morago ga tshwaetšo ka fase ga maemo a greenhouse. (A) Hydrogen peroxide (H2O2; nmol g−1 FW) ka 72 hpt, (B) superoxide anion (O2•−; nmol g−1 FW) ka 72 hpt, (C) malondialdehyde (MDA; nmol g−1 FW) ka 72 hpt, (D) palo yohle ya phenols qhibilihang (mg GAE g−1 FW) ka 72 hpt, (E) palomoka ya di-flavonoid tše di qhibidigago (mg RE g−1 FW) ka 72 hpt, (F) palomoka ya diaminoesiti tša mahala (mg g−1 FW) ka 72 hpt, le (G) diteng tša proline (mg g−1 FW) ka 72 hpt. Ditekanyetšo di emela magareng ± go fapoga ga maemo (bolela ± SD) ya diphetolelo tše 5 tša thutaphedi (n = 5). Ditlhaka tše di fapanego di bontšha diphapano tše bohlokwa tša dipalopalo magareng ga dikalafo (p <0.05).