Re begile peleng gore maemo a serum a metabolite ya tryptophan yeo e tšwago mala a indole-3-propionic acid (IPA) a tlase go balwetši bao ba nago le fibrosis ya sebete. Thutong ye, re nyakišišitše transcriptome le DNA methylome ka dibeteng tše di nonnego mabapi le maemo a serum IPA, gammogo le tema ya IPA go hlohleletša phenotypic inactivation ya disele tša stellate tša sebete (HSCs) ka vitro.
Thuto e be e akaretša balwetši ba 116 ba ba nonnego bao ba se nago bolwetši bja swikiri bja mellitus bja mohuta wa bobedi (T2DM) (nywaga ya 46.8 ± 9.3; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) bao ba ilego ba buiwa ka bariatric kua Kuopio Bariatric Surgery Center (KOBS). Maemo a IPA a go dikološa a ile a lekantšhwa ka chromatography ya seela-mass spectrometry (LC-MS), tshekatsheko ya transcriptome ya sebete e dirilwe ka tatelano ya palomoka ya RNA, gomme tshekatsheko ya methylation ya DNA e dirilwe ka go šomiša Infinium HumanMethylation450 BeadChip. Disele tša stellate tša sebete tša batho (LX-2) di ile tša dirišetšwa diteko tša ka gare ga vitro.
Maemo a serum IPA a be a tswalanywa le go bontšhwa ga dikarolwana tša leabela tšeo di akaretšwago ditseleng tša apoptotic, mitophagic le tša bophelo bjo botelele sebeteng. Lephelo la AKT serine/threonine kinase 1 (AKT1) e be e le lephelo la go dirišana le legolo kudu le le le bušago ka gare ga transcript ya sebete le diprofaele tša DNA methylation. Kalafo ya IPA e ile ya hlohleletša apoptosis, ya fokotša go hema ga mitochondrial, gomme ya fetoša sebopego sa disele le mafolofolo a mitochondrial ka go fetola polelo ya dikarolwana tša leabela tšeo di tsebjago ka go laola fibrosis, apoptosis le go phologa ga disele tša LX-2.
Ge di tšerwe mmogo, ya data ye e thekga gore IPA e na le ditlamorago tša kalafo tšeo di ka bago gona gomme e ka hlohleletša apoptosis le go šuthiša phenotype ya HSC go ya boemong bjo bo sa šomego, ka go realo ya katološa kgonagalo ya go thibela fibrosis ya sebete ka go šitišana le go tsenywa tirišong ga HSC le metabolism ya mitochondrial.
Go ata ga go nona kudu le bolwetši bja metaboliki go tswalanywa le go oketšega ga ditiragalo tša bolwetši bja sebete sa makhura bjo bo sepedišanago le metaboliki (MASLD); bolwetši bo ama 25% go ya go 30% ya baagi ka kakaretšo [1]. Ditlamorago tše kgolo tša etiology ya MASLD ke fibrosis ya sebete, e lego tshepedišo ye e fetogago yeo e hlaolwago ka go kgoboketšwa mo go tšwelago pele ga matrix ya ka ntle ga sele ya tlhale (ECM) [2]. Disele tše dikgolo tšeo di akaretšwago go fibrosis ya sebete ke disele tša stellate tša sebete (HSCs), tšeo di bontšhago diphenotypes tše nne tše di tsebjago: quiescent, activated, inactivated le senescent [3, 4]. HSCs ka kenya tshebetsong le transdifferentiate ho tloha foromo quiescent ho proliferative fibroblast-joaloka lisele tse nang le ditlhoko phahameng matla, le eketsehileng polelo ea α-boreleli mesifa actin (α-SMA) le mofuta I collagen (Col-I) [5, 6]. Nakong ya go bušetšwa morago ga fibrosis ya sebete, di-HSC tše di šomišitšwego di fedišwa ka apoptosis goba go se šome. Ditshepetšo tše di akaretša downregulation ya dikarolwana tša leabela tša fibrogenic le modulation ya dikarolwana tša leabela tša prosurvival (tše bjalo ka ditsela tša go laetša tša NF-κB le PI3K/Akt) [7, 8], gammogo le diphetogo tša mafolofolo a mitochondrial le mošomo [9].
Maemo a serum a tryptophan metabolite indole-3-propionic acid (IPA), e tšweleditšwego ka maleng, a hweditšwe a fokotšegile malwetšing a metaboliki ya batho go akaretšwa MASLD [10-13]. IPA e amana le go ja tlhale ya dijo, e tsebja ka ditlamorago tša yona tša antioxidant le anti-inflammatory, gomme e fokotša phenotype ya steatohepatitis yeo e sego ya bjala (NASH) yeo e hlotšwego ke dijo ka vivo le ka vitro [11-14]. Bohlatse bjo bongwe bo tšwa nyakišišong ya rena ya nakong e fetilego, yeo e bontšhitšego gore maemo a serum IPA a be a le tlase go balwetši bao ba nago le fibrosis ya sebete go feta balwetši bao ba nonnego bao ba se nago fibrosis ya sebete Thutong ya Kuopio Bariatric Surgery Study (KOBS). Go feta moo, re bontšhitše gore kalafo ya IPA e ka fokotša polelo ya dikarolwana tša leabela tšeo e lego maswao a classical a go kgomarela ga disele, go huduga ga disele le go tsenywa tirišong ga disele tša kutu tša hematopoietic mohlaleng wa sele ya stellate ya sebete ya motho (LX-2) gomme ke metabolite yeo e ka bago gona ya hepatoprotective [15]. Le ge go le bjalo, ga go sa hlaka gore IPA e hlohleletša bjang go boela morago ga fibrosis ya sebete ka go dira gore apoptosis ya HSC le bioenergetics ya mitochondrial e šome.
Mo, re bontšha gore serum IPA e tswalanywa le polelo ya dikarolwana tša leabela tšeo di humišitšwego ka apoptosis, mitophagy, le ditsela tša bophelo bjo botelele ka sebeteng sa batho ba ba nonnego eupša e sego ba mohuta wa 2 wa bolwetši bja swikiri (KOBS). Go feta fao, re hweditše gore IPA e ka hlohleletša go tlošwa le go senywa ga disele tša kutu tša hematopoietic tše di šomišitšwego (HSCs) ka tsela ya go se šome. Dipoelo tše di utolla tema ye mpsha ya IPA, go e dira gore e be sepheo sa kalafo seo se ka bago gona go tšwetša pele go boela morago ga fibrosis ya sebete.
Thuto ya nakong e fetilego sehlopheng sa KOBS e bontšhitše gore balwetši bao ba nago le fibrosis ya sebete ba be ba e-na le maemo a tlase a IPA ao a dikološwago ge a bapetšwa le balwetši bao ba se nago fibrosis ya sebete [15]. Go kgapeletša ntle mafelelo a ka bago a ferekanyago a bolwetši bja swikiri bja mohuta wa 2, re ile ra thwala balwetši ba 116 ba ba nonnego bao ba se nago bolwetši bja swikiri bja mohuta wa 2 (bolela mengwaga ± SD: 46.8 ± 9.3 mengwaga; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) (Table 1) go tšwa thutong ye e tšwelago pele ya KOBS bjalo ka baagi ba nyakišišo [16]. Batšeakarolo ka moka ba file tumelelo ye e ngwadilwego ye e nago le tsebo gomme protocol ya thuto e ile ya amogelwa ke Komiti ya Boitshwaro ya Sepetlele sa Selete sa North Savo go ya ka Kgoeletšo ya Helsinki (54/2005, 104/2008 le 27/2010).
Dipeelano tša biopsy ya sebete di ile tša hwetšwa nakong ya go buiwa ga bariatric gomme tša hlahlobja ka histologically ke ditsebi tša malwetši tšeo di nago le phihlelo go ya ka ditekanyetšo tšeo di hlalositšwego peleng [17, 18]. Ditekanyetšo tša kelo di akareditšwe go Lenaneo la Tlaleletšo la S1 gomme di hlalošitšwe peleng [19].
Disampole serum ya go ikona dijo di ile tša sekaseka ka chromatography ya seela yeo e sa nepišwago-mass spectrometry (LC-MS) bakeng sa tshekatsheko ya metabolomics (n = 116). Disampole di ile tša sekaseka ka go šomiša tshepedišo ya UHPLC-qTOF-MS (1290 LC, 6540 qTOF-MS, Agilent Technologies, Waldbronn, Karlsruhe, Jeremane) bjalo ka ge go hlalošitšwe peleng19. Tlhaolelo ya bjala bja isopropyl (IPA) e be e theilwe godimo ga nako ya go boloka le papiso ya sepektheremo sa MS/MS le maemo a hlwekilego. Boima bja leswao la IPA (sebaka sa tlhōrō) bo ile bja lebelelwa ditshekatshekong ka moka tše dingwe [20].
Tatelano ya RNA ya sebete ka moka e dirilwe ka go šomiša Illumina HiSeq 2500 gomme ya data e ile ya šongwa pele bjalo ka ge go hlalošitšwe peleng [19, 21, 22]. Re ile ra phetha nepišitšwego phapano polelo and analysis ya dingwalwa ama mitochondrial mosebetsi / biogenesis sebelisa 1957 liphatsa tsa lefutso khethiloeng ho tloha MitoMiner 4.0 polokelongtshedimosetso [ 23 ]. Tshekatsheko ya methylation ya DNA ya sebete e dirilwe ka go šomiša Infinium HumanMethylation450 BeadChip (Illumina, San Diego, CA, USA) ka go šomiša mokgwa wo o swanago le wo o hlalošitšwego peleng [24, 25].
Disele tša stellate tša sebete sa batho (LX-2) di ile tša fiwa ka botho ke Mop Stefano Romeo gomme di ile tša godišwa le go hlokomelwa ka gare ga sedirišwa sa DMEM/F12 (Biowest, L0093-500, 1% Pen/Strep; Lonza, DE17-602E, 2% FBS; Gibco, 10270-106). Go kgetha tekanyo ya go šoma ya IPA, disele tša LX-2 di ile tša alafša ka mahloriso a go fapana a IPA (10 μM, 100 μM le 1 mM; Sigma, 220027) ka gare ga DMEM/F12 magareng ka 24 h. Go feta fao, go nyakišiša bokgoni bja IPA bja go dira gore di-HSC di se šome, disele tša LX-2 di ile tša alafša mmogo le 5 ng/ml TGF-β1 (ditshepedišo tša R&D, 240-B-002/CF) le 1 mM IPA ka gare ga sedirišwa seo se se nago serum ka 24 h. Bakeng sa taolo ya dikoloi ye e swanetšego, 4 nM HCL yeo e nago le 0.1% BSA e ile ya šomišwa bakeng sa kalafo ya TGF-β1 gomme 0.05% DMSO e ile ya šomišwa bakeng sa kalafo ya IPA, gomme bobedi bja tšona di ile tša šomišwa mmogo bakeng sa kalafo ya motswako.
Apoptosis e ile ya hlahlobja ka go šomiša FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit ka 7-AAD (Biolegend, San Diego, CA, USA, Cat# 640922) go ya ka ditaelo tša motšweletši. Ka boripana, LX-2 (1 × 105 disele / sediba) di ile tša godišwa bošego ka moka ka dipoleiteng tša didiba tše 12 gomme ka morago tša alafša ka ditekanyo tše ntši tša IPA goba IPA le TGF-β1. Letšatšing le le latelago, disele tše di phaphametšego le tše di kgomarelago di ile tša kgoboketšwa, tša trypsinized, tša hlatswiwa ka PBS, tša emišwa gape ka gare ga buffer ya go tlama ya Annexin V, gomme tša bjalwa ka FITC-Annexin V le 7-AAD ka 15 min.
Mitochondria ka diseleng tše di phelago di ile tša šilafatšwa bakeng sa mošomo wa oxidative ka go diriša MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA). Bakeng sa diteko tša MTR, disele tša LX-2 di ile tša bjalwa ka di-density tše di lekanago le IPA le TGF-β1. Ka morago ga 24 h, disele tše di phelago di ile tša trypsinized, tša hlatswiwa ka PBS, gomme ka morago tša bjalwa ka 100 μM MTR ka gare ga sedirišwa sa go hloka serum ka 37 °C ka 20 min bjalo ka ge go hlalošitšwe peleng [ 26 ]. Bakeng sa tshekatsheko ya sebopego sa sele ye e phelago, bogolo bja sele le go raragana ga cytoplasmic di ile tša sekaseka ka go šomiša ditekanyetšo tša go phatlalatšwa pele (FSC) le go phatlalatšwa ka lehlakoreng (SSC), ka go latelelana.
Datha ka moka (ditiragalo tše 30,000) di hweditšwe ka go šomiša NovoCyte Quanteon (Agilent) gomme ya sekaseka ka go šomiša NovoExpress® 1.4.1 goba FlowJo V.10 software.
Sekgahla sa tšhomišo ya oksitšene (OCR) le seelo sa esiti ya ka ntle ga sele (ECAR) di ile tša lekantšhwa ka nako ya nnete ka go šomiša Seahorse Extracellular Flux Analyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) yeo e hlometšwego ka Seahorse XF Cell Mito Stress go ya ka ditaelo tša motšweletši. Ka boripana, 2 × 104 disele tša LX-2/sediba di ile tša bjalwa godimo ga dipoleiti tša setšo sa disele tša XF96. Ka morago ga go dušwa bošego ka moka, disele di ile tša alafša ka isopropanol (IPA) le TGF-β1 (Mekgwa ya Tlaleletšo 1). Tshekatsheko ya datha e dirilwe ka go šomiša softwere ya Seahorse XF Wave, yeo e akaretšago Jenereithara ya Pego ya Teko ya Phenotype ya Enetši ya Sele ya Seahorse XF. Go tšwa go se, go ile gwa balwa Bioenergetic Health Index (BHI) [27].
Palomoka ya RNA e ile ya ngwalwa ka gare ga cDNA. Bakeng sa mekgwa ye e itšego, bona tšhupetšo [15]. Maemo a mRNA ya proteine ​​ya esiti ya ribosomal ya batho ya 60S ya ribosomal P0 (RPLP0) le cyclophilin A1 (PPIA) di ile tša šomišwa bjalo ka taolo ya dikarolwana tša leabela tše di bopago. The QuantStudio 6 pro Real-Time PCR System (Thermo Fisher, Landsmeer, The Netherlands) e ile ea sebelisoa le TaqMan TM Fast Advanced Master Mix Kit (Applied Biosystems) kapa Sensifast SYBR Lo-ROX Kit (Bioline, BIO 94050), le leloko liphatsa tsa lefutso polelo fold ile balwa sebelisa bapisoa Ct boleng baesekele ditekanyetos (ΔΔCt) le ∆∆Ct mokgwa wa. Dintlha tša di-primer di filwe ka go Ditafola tša Tlaleletšo tša S2 le S3.
DNA ya nyutlelie (ncDNA) le DNA ya mitochondrial (mtDNA) di ile tša ntšhwa ka go šomiša sedirišwa sa madi le dinama tša DNeasy (Qiagen) bjalo ka ge go hlalositšwe peleng [28]. Palo ye e lekanyeditšwego ya mtDNA e ile ya balwa ka go bala tekanyo ya selete se sengwe le se sengwe sa mtDNA seo se nepišitšwego go magareng a thutafase a dilete tše tharo tša DNA ya nuclear (mtDNA/ncDNA), bjalo ka ge go hlalošitšwe ka botlalo go Mekgwa ya Tlaleletšo 2. Dintlha tša di-primer tša mtDNA le ncDNA di filwe go Lenaneo la Tlaleletšo la S4.
Disele tše di phelago di ile tša šilafatšwa ka MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) go bona ka leihlo la kgopolo dinetweke tša mitochondrial tša magareng ga disele le tša ka gare ga disele. LX-2 disele (1 × 104 disele / sediba) ba ile ba cultured ka khalase diselaete ka tshwanelanang khalase-bottomed setso lipoleiti (Ibidi GmbH, Martinsried, Jeremane). Ka morago ga 24 h, disele tše di phelago tša LX-2 di ile tša bjalwa ka 100 μM MTR ka 20 min ka 37 °C gomme di-nuclei tša sele di ile tša šilafatšwa ka DAPI (1 μg/ml, Sigma-Aldrich) bjalo ka ge go hlalositšwe peleng [29]. Dinetweke tša mitochondrial di ile tša bonwa ka leihlo la kgopolo ka go šomiša maekerosekopo ye e fetotšwego ya Zeiss Axio Observer (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Jeremane) yeo e hlomilwego ka modula wa confocal wa Zeiss LSM 800 ka 37 °C ka lefaufaung leo le kolobilego ka 5% ya CO2 ka go šomiša maikemišetšo a 63 × NA 1.3. Re hweditše diswantšho tše lesome tša lelokelelo la Z bakeng sa mohuta o mongwe le o mongwe wa mohlala. Letoto le lengwe le le lengwe la Z le na le dikarolo tše 30, ye nngwe le ye nngwe e na le botenya bja 9.86 μm. Bakeng sa sampole e nngwe le e nngwe, diswantšho tša mafelo a lesome a fapanego a pono di ile tša hwetšwa ka go šomiša softwere ya ZEN 2009 (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Jeremane), gomme tshekatsheko ya sebopego sa mitochondrial e dirilwe ka go šomiša softwere ya ImageJ (v1.54d) [30, 31] go ya ka ditekanyetšo tšeo di hlalošitšwego ka botlalo go Mekgwa ya Tlaleletšo 3.
Disele di ile tša tsepama ka 2% ya glutaraldehyde ka gare ga 0.1 M phosphate buffer, gomme tša latelwa ke go tsepama ka 1% ya tharollo ya osmium tetroxide (Sigma Aldrich, MO, USA), ganyenyane-ganyenyane tša ntšhwa meetse ka acetone (Merck, Darmstadt, Jeremane), gomme mafelelong tša tsenywa ka gare ga epoxy resin. Dikarolo tše di sesane kudu di ile tša lokišetšwa le go šilafatšwa ka 1% ya uranyl acetate (Merck, Darmstadt, Jeremane) le 1% ya lead citrate (Merck, Darmstadt, Jeremane). Diswantšho tša ultrastructural di hweditšwe ka go šomiša maekerosekopo ya elektrone ya phetišetšo ya JEM 2100F EXII (JEOL Ltd, Tokyo, Japane) ka gagamalo ya go akgofiša ya 80 kV.
Sebopego sa disele tša LX-2 tšeo di alafilwego ka IPA ka 24 h se ile sa sekaseka ka microscopy ya kgato-phapano ka go godiša ga 50x ka go šomiša maekerosekopo ya seetša se se fetotšwego sa Zeiss (Zeiss Axio Vert.A1 le AxioCam MRm, Jena, Jeremane).
ya data tleleniki ba ile ba bontšoa e le bolela ± maemo a kheloha kapa mahareng (interquartile fapaneng: IQR). Tshekatsheko ya tsela e tee ya phapano (diphetogo tše di tšwelago pele) goba teko ya χ2 (diphetogo tša magoro) di šomišitšwe go bapetša diphapano magareng ga dihlopha tše tharo tša thuto. Sekgahla sa maaka sa go ba le dipozitifo (FDR) se ile sa šomišwa go phošolla bakeng sa diteko tše ntši, gomme dikarolwana tša leabela tšeo di nago le FDR <0.05 di ile tša tšewa e le tše bohlokwa go ya ka dipalopalo. Spearman kgokagano and analysis ile sebediswa ho correlate CpG DNA methylation le IPA pontšo matla, le lebitso p boleng (p <0.05) begilwe.
Tshekatsheko ya tsela e dirilwe ka go šomiša sedirišwa sa tshekatsheko ya sete ya dikarolwana tša leabela seo se theilwego go wepe (WebGestalt) bakeng sa dingwalwa tše 268 (p <0.01), dingwalwa tše 119 tšeo di amanago le mitochondria (p <0.05), le di-CpG tše 4350 go tšwa go dingwalwa tša sebete tše 3093 tšeo di bego di amana le maemo a IPA a serum ao a dikološwago. Sedirišwa sa Venny DB (phetolelo ya 2.1.0) seo se hwetšagalago ka bolokologi se ile sa šomišwa go hwetša dikarolwana tša leabela tše di lekelelanago, gomme StringDB (phetolelo ya 11.5) e ile ya šomišwa go bona ka leihlo la kgopolo ditirišano tša proteine-proteine.
Bakeng sa teko ya LX-2, dišupommu di ile tša lekwa gore di tlwaelegile ka go šomiša teko ya D'Agostino-Pearson. Data e hweditšwe go tšwa go bonyane diphetolelo tše tharo tša thutaphedi gomme ya dirwa ka fase ga ANOVA ya tsela e tee ka teko ya Bonferroni ya ka morago ga nako. Boleng bja p bja ka fase ga 0.05 bo be bo tšewa e le bjo bohlokwa ka dipalopalo. Data di tšweletšwa bjalo ka magareng ± SD, gomme palo ya diteko e bontšhitšwe seswantšhong se sengwe le se sengwe. Ditshekatsheko ka moka le dikerafo di dirilwe ka go šomiša softwere ya dipalopalo ya GraphPad Prism 8 ya Windows (GraphPad Software Inc., phetolelo ya 8.4.3, San Diego, USA).
Sa pele, re ile ra nyakišiša tswalano ya tekanyo ya IPA ya serum le dingwalwa tša sebete, mmele ka moka le tša mitochondrial. Ka palomoka ya profaele ya transcript, lephelo le matla kudu leo ​​le amanago le maemo a serum IPA e be e le MAPKAPK3 (FDR = 0.0077; mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 3); ka mitochondria-amanang le transcript profil, matla ka ho fetisisa amanang lephelo e ne e le AKT1 (FDR = 0.7621; AKT serine / threonine kinase 1) (Faele e eketsehileng 1 le faele e eketsehileng 2).
Ka morago re ile ra sekaseka dingwalwa tša lefase ka bophara (n = 268; p <0.01) le dingwalwa tše di amanago le mitochondria (n = 119; p <0.05), mafelelong ra hlaola apoptosis bjalo ka tsela ya bohlokwa kudu ya canonical (p = 0.0089). Bakeng sa dingwalwa tša mitochondrial tšeo di amanago le maemo a serum IPA, re ile ra tsepamiša kgopolo go apoptosis (FDR = 0.00001), mitophagy (FDR = 0.00029), le ditsela tša go laetša TNF (FDR = 0.000006) ( Seswantšho 1A, Lenaneo 2, le Ditshwantšho tša Tlaleletšo 1A-B).
Tshekatsheko ye e lekelelanago ya dingwalwa tša lefase ka bophara, tšeo di amanago le mitochondria, le DNA methylation ka sebeteng sa motho ka go amana le maemo a serum IPA. A e emela dingwalwa tše 268 tša lefase ka bophara, dingwalwa tše 119 tše di amanago le mitochondria, le dingwalwa tša DNA methylated tšeo di beakantšwego go mafelo a 3092 a CpG ao a amanago le maemo a serum IPA (dikelo tša p < 0.01 bakeng sa dingwalwa tša lefase ka bophara le DNA methylated, le dikelo tša p < 0.05 bakeng sa dingwalwa tša mitochondrial). Dingwalwa tše kgolo tše di lekelelanago di bontšhwa bogareng (AKT1 le YKT6). B Mmapa wa tirišano wa dikarolwana tša leabela tše 13 tšeo di nago le maemo a godimodimo a tirišano (0.900) le dikarolwana tše dingwe tša leabela o agilwe go tšwa go dikarolwana tša leabela tše 56 tšeo di lekelelanago (selete sa mola wo motsothwa) tšeo di bego di amana kudu le maemo a serum IPA ka go šomiša sedirišwa sa inthanete sa StringDB. Tala: Dipshio tše di beakantšwego go karolo ya sele ya Gene Ontology (GO): mitochondria (GO:0005739). AKT1 ke proteine ​​yeo e nago le maemo a godimodimo (0.900) bakeng sa ditirišano le diprotheine tše dingwe tšeo di theilwego godimo ga ya data (yeo e theilwego godimo ga meepo ya sengwalwa, diteko, dipolokelo tša tshedimošo, le polelo ya tirišano). Di-node tša netweke di emela diprotheine, gomme mapheko a emela dikgokagano magareng ga diprotheine.
Ka ge di- metabolite tša microbiota ya mala di ka laola sebopego sa epigenetic ka DNA methylation [32], re ile ra nyakišiša ge e ba maemo a serum IPA a be a tswalanywa le methylation ya DNA ya sebete. Re hweditše gore mafelo a mabedi a magolo a methylation ao a amanago le maemo a serum IPA a be a le kgauswi le selete se se humilego ka proline-serine 3 (C19orf55) le setho sa lapa la protheine sa go tšhoga phišo B (ye nnyane) 6 (HSPB6) (Faele ya tlaleletšo 3). DNA methylation ya 4350 CpG (p <0.01) e ile ya tswalanywa le maemo a serum IPA gomme e humišitšwe ka ditsela tša taolo ya bophelo bjo botelele (p = 0.006) ( Seswantšho 1A, Lenaneo 2, le Seswantšho sa Tlaleletšo 1C).
Go kwešiša mekgwa ya thutaphedi yeo e lego motheo wa dikamano magareng ga maemo a serum IPA, dingwalwa tša lefase ka bophara, dingwalwa tše di amanago le mitochondria, le DNA methylation ka sebeteng sa motho, re dirile tshekatsheko ya go swana ya dikarolwana tša leabela tšeo di hlaotšwego tshekatshekong ya tsela ya peleng ( Seswantšho 1A ). Dipoelo tša tshekatsheko ya go humiša tsela ya dikarolwana tša leabela tše 56 tše di lekelelanago (ka gare ga mola wo motsothwa go Seswantšho 1A) di bontšhitše gore tsela ya apoptosis (p = 0.00029) e tšweleditše dikarolwana tše pedi tša leabela tše di tlwaelegilego go ditshekatsheko tše tharo: AKT1 le YKT6 (YKT6 v-SNARE homolog), bjalo ka ge go bontšhitšwe seswantšhong sa Venn (Setshwantšho sa Tlaleletšo 2 le Seswantšho 1A). Ka mo go kgahlišago, re hweditše gore AKT1 (cg19831386) le YKT6 (cg24161647) di be di tswalanywa gabotse le maemo a serum IPA (Faele ya tlaleletšo 3). Go šupa ditirišano tša proteine ​​tšeo di ka bago gona magareng ga ditšweletšwa tša dikarolwana tša leabela, re kgethile dikarolwana tša leabela tše 13 tšeo di nago le maemo a godimodimo a selete se se tlwaelegilego (0.900) gare ga dikarolwana tša leabela tše 56 tše di lekelelanago bjalo ka tsenyo gomme ra aga mmapa wa tirišano. Go ya ka maemo a boitshepo (botshepo bja ka thoko), lephelo la AKT1 leo le nago le maemo a godimodimo (0.900) le be le le ka godimo (Setshwantšho 1B).
Go ya ka tshekatsheko ya tsela, re hweditše gore apoptosis e be e le tsela ye kgolo, ka fao re nyakišišitše ge e ba kalafo ya IPA e tla ama apoptosis ya di-HSC ka vitro. Re bontšhitše pejana gore ditekanyo tše di fapanego tša IPA (10 μM, 100 μM, le 1 mM) e be e se mpholo go disele tša LX-2 [15]. Thuto ye e bontšhitše gore kalafo ya IPA ka 10 μM le 100 μM e okeditše palo ya disele tše di šomago le tša necrotic. Le ge go le bjalo, ge go bapetšwa le sehlopha sa taolo, go kgona ga sele go ile gwa fokotšega ka 1 mM IPA concentration, mola seelo sa necrosis ya sele se ile sa dula se sa fetoge (Setshwantšho 2A, B). Se se latelago, go hwetša mahloriso a mabotse kudu go hlohleletša apoptosis ka diseleng tša LX-2, re ile ra dira diteko tša 10 μM, 100 μM, le 1 mM IPA ka 24 h ( Seswantšho 2A-E le Seswantšho sa Tlaleletšo 3A-B). Se se kgahlišago ke gore IPA 10 μM le 100 μM e ile ya fokotša seelo sa apoptosis (%), le ge go le bjalo, IPA 1 mM e okeditše apoptosis ya morago le seelo sa apoptosis (%) ge e bapetšwa le taolo gomme ka fao e ile ya kgethwa bakeng sa diteko tše dingwe (Difego 2A–D).
IPA e hlohleletša apoptosis ya disele tša LX-2. Annexin V le 7-AAD mokgwa wa go tšhilafatša gabedi o ile wa šomišwa go lekanyetša seelo sa apoptotic le sebopego sa sele ka cytometry ya go ela. Disele tša BA di ile tša bjalwa ka 10 μM, 100 μM le 1 mM IPA ka 24 h goba ka F-H TGF-β1 (5 ng/ml) le 1 mM IPA ka gare ga sedirišwa sa go hloka serum ka 24 h. A: disele tše di phelago (Annexin V -/ 7AAD-); B: disele tša necrotic (Annexin V -/ 7AAD +); C, F: ka pela (Annexin V +/ 7AAD-); D, G: morago ga nako (Annexin V + / 7AAD. +); E, H: phesente ya palomoka ya disele tša mathomo le tša morago tša apoptotic ka seelo sa apoptotic (%). Data di bontšhwa bjalo ka magareng ± SD, n = 3 diteko tše di ikemetšego. Dipapišo tša dipalopalo di dirilwe ka go šomiša ANOVA ya tsela e tee ka teko ya Bonferroni post hoc. * p < 0,05; **** p < 0,0001
Bjalo ka ge re bontšhitše peleng, 5 ng/ml TGF-β1 e ka hlohleletša go tsenywa tirišong ga HSC ka go oketša polelo ya dikarolwana tša leabela tša maswao a kgale [15]. LX-2 disele di ile tša alafša ka 5 ng / ml TGF-β1 le 1 mM IPA ka kopanyo (Fig. 2E-H). TGF-β1 kalafo ga se ya fetoša seelo sa apoptosis, le ge go le bjalo, IPA co-treatment e okeditše morago ga nako apoptosis le apoptosis sekhahla (%) ge e bapetšwa le kalafo ya TGF-β1 (Fig. 2E-H). Dipoelo tše di laetša gore 1 mM IPA e ka kgothaletša apoptosis ka diseleng tša LX-2 ka go ikemela ka TGF-β1 induction.
Re ile ra nyakišiša gape ka mafelelo a IPA go go hema ga mitochondrial ka diseleng tša LX-2. Diphetho di bontšhitše gore 1 mM IPA e fokoditše ditekanyetšo tša seelo sa tšhomišo ya oksitšene (OCR): go hema mo e sego ga mitochondrial, go hema ga basal le mo go phagamego, go dutla ga prothone le tšweletšo ya ATP ge e bapetšwa le sehlopha sa taolo (Setshwantšho 3A, B), mola tšhupamabaka ya maphelo ya bioenergetic (BHI) e sa fetoge.
IPA e fokotša go hema ga mitochondrial ka diseleng tša LX-2. Koba ya go hema ya mitochondrial (OCR) e tšweletšwa bjalo ka ditekanyetšo tša go hema ga mitochondrial (go hema mo e sego ga mitochondrial, go hema ga basal, go hema mo gogolo, go dutla ga prothone, moloko wa ATP, SRC le BHI). Disele A le B di ile tša bjalwa ka 10 μM, 100 μM le 1 mM IPA ka 24 h, ka go latelelana. Disele C le D di ile tša bjalwa ka TGF-β1 (5 ng/ml) le 1 mM IPA ka gare ga sedirišwa sa go hloka serum ka 24 h, ka go latelelana. Ditekanyo ka moka di ile tša tlwaetšwa go diteng tša DNA ka go šomiša sedirišwa sa CyQuant. BHI: tšhupamabaka ya maphelo a bioenergetic; SRC: bokgoni bja polokelo ya go hema; OCR: sekhahla sa tshebediso ya oksijene. Data di tšweletšwa bjalo ka magareng ± go fapoga ga maemo (SD), n = 5 diteko tše di ikemetšego. Dipapišo tša dipalopalo di dirilwe ka go šomiša ANOVA ya tsela e tee le teko ya ka morago ga nako ya Bonferroni. * p < 0,05; ** p < 0,01; le *** p < 0.001
Go hwetša kwešišo ye e feletšego ya mafelelo a IPA go profil ya bioenergetic ya disele tša LX-2 tšeo di šomišitšwego ka TGF-β1, re ile ra sekaseka mitochondrial oxidative phosphorylation ka OCR (Fig. 3C, D). Diphetho di bontšhitše gore kalafo ya TGF-β1 e be e ka fokotša palomoka ya go hema, bokgoni bja polokelo ya go hema (SRC) le BHI ge di bapetšwa le sehlopha sa taolo (Fig. 3C,D). Go tlaleletša, kalafo ya motswako e ile ya fokotša go hema ga basal, go dutla ga prothone le tšweletšo ya ATP, eupša SRC le BHI di be di phagame kudu go feta tšeo di alafilwego ka TGF-β1 (Fig. 3C,D).
Re ile ra boela ra phetha “Tlhahlobo ya Phenotype ya Enetši ya Disele” yeo e filwego ke softwere ya Seahorse (Setshwantšho sa Tlaleletšo. 4A–D). Bjalo ka ge go bontšhitšwe go Supplementary Fig. 3B, bobedi bokgoni bja metaboliki bja OCR le ECAR bo ile bja fokotšega ka morago ga kalafo ya TGF-β1, le ge go le bjalo, ga go na phapano yeo e lemogilwego ka dihlopheng tša kalafo ya motswako le ya IPA ge e bapetšwa le sehlopha sa taolo. Go feta moo, bobedi maemo a basal le a kgateletšego a OCR a ile a fokotšega ka morago ga kalafo ya motswako le ya IPA ge e bapetšwa le sehlopha sa taolo (Setshwantšho sa Tlaleletšo. 4C). Ka mo go kgahlišago, mokgwa o swanago o ile wa bonwa ka kalafo ya motswako, moo go se nago phetogo maemong a basal le a kgateletšego a ECAR yeo e ilego ya bonwa ge e bapetšwa le kalafo ya TGF-β1 (Setshwantšho sa Tlaleletšo. 4C). Ka HSCs, phokotšo ya mitochondrial oxidative phosphorylation le bokgoni bja kalafo ya motswako go bušetša SCR le BHI ka morago ga go pepentšhwa kalafong ya TGF-β1 ga se ya fetoša bokgoni bja metaboliki (OCR le ECAR). Ge di tšerwe mmogo, dipoelo tše di laetša gore IPA e ka fokotša bioenergetics ka go di-HSC, e šišinya gore IPA e ka hlohleletša profaele ya maatla a fase yeo e šuthišago phenotype ya HSC go ya go go se šome (Setshwantšho sa Tlaleletšo 4D).
Phello ya IPA go mafolofolo a mitochondrial e ile ya nyakišišwa ka go šomiša palo ya mahlakore a mararo ya sebopego sa mitochondrial le dikgokagano tša netweke gammogo le go tšhilafala ga MTR (Setshwantšho 4 le Seswantšho sa Tlaleletšo 5). Seswantšho 4 se bontšha gore, ge se bapetšwa le sehlopha sa taolo, kalafo ya TGF-β1 e ile ya fokotša lefelo la bokagodimo bja magareng, palo ya lekala, botelele bja lekala ka moka, le palo ya kopano ya lekala (Figure 4A le B) gomme ya fetoša karolo ya mitochondria go tšwa go sebopego sa nkgokolo go ya go sa magareng (Figure 4C). Ke kalafo ya IPA fela yeo e ilego ya fokotša bophagamo bja mitochondrial bja magareng gomme ya fetoša karolo ya mitochondria go tšwa go sebopego sa nkgokolo go ya go sa magareng ge se bapetšwa le sehlopha sa taolo ( Seswantšho 4A ). Ka go fapana, sphericity, bolela botelele bja lekala, le mošomo wa mitochondrial wo o hlahlobjago ke MTR yeo e ithekgilego ka bokgoni bja lera la mitochondrial (Setshwantšho 4A le E) di ile tša dula di sa fetoge gomme ditekanyetšo tše ga se tša fapana magareng ga dihlopha. Ge di tšerwe mmogo, dipoelo tše di šišinya gore kalafo ya TGF-β1 le IPA e bonala e fetoša sebopego le bogolo bja mitochondrial gammogo le go raragana ga netweke ka diseleng tše di phelago tša LX-2.
IPA e fetoša mafolofolo a mitochondrial le bontši bja DNA ya mitochondrial ka diseleng tša LX-2. A. Moemedi confocal litšoantšo tsa phela LX-2 lisele tse incubated le TGF-β1 (5 ng / ml) le 1 mM IPA bakeng sa 24 h ka serum-free mahareng bontša mitochondrial dinetweke tseo stained le Mitotracker TM Red CMXRos le nuclei stained putsoa le DAPI. ya data yohle e ne e na le bonyane litšoantšo tse 15 ka sehlopha. Re ile ra hwetša diswantšho tše 10 tša Z-stack bakeng sa mohuta o mongwe le o mongwe wa mohlala. Tatelano ye nngwe le ye nngwe ya Z-axis e be e na le dilae tše 30, ye nngwe le ye nngwe e na le botenya bja 9.86 μm. Sekala bareng: 10 μm. B. Dilo tša moemedi (mitochondria fela) tšeo di hlaotšwego ka go diriša thresholding ya go fetoga seswantšhong. Tshekatsheko ya boleng le papiso ya dikgokagano tša netweke ya sebopego sa mitochondrial di dirilwe bakeng sa disele ka moka sehlopheng se sengwe le se sengwe. C. Kgafetšakgafetša ya dikarolwana tša sebopego sa mitochondrial. Ditekanyetšo tša kgauswi le 0 di laetša dibopego tša nkgokolo, gomme dikelo tša kgauswi le 1 di laetša dibopego tša filamentous. D Diteng tša DNA ya mitochondrial (mtDNA) di ile tša laolwa bjalo ka ge di hlalošitšwe ka go Didirišwa le Mekgwa. E MitotrackerTM Red CMXRos and analysis e ile ea etsoa ka phallo cytometry (30,000 liketsahalo) e le hlalositsoeng ka Didirišwa le Mekgwa. Data di hlahiswa e le bolela ± SD, n = 3 liteko ikemetseng. Dipapišo tša dipalopalo di dirilwe ka go šomiša ANOVA ya tsela e tee le teko ya ka morago ga nako ya Bonferroni. * p < 0,05; ** p < 0,01; *** p < 0.001; **** p < 0,0001
Ka morago re ile ra sekaseka diteng tša mtDNA ka diseleng tša LX-2 bjalo ka sešupo sa palo ya mitochondrial. Ge go bapetšwa le sehlopha sa taolo, dikagare tša mtDNA di ile tša oketšega sehlopheng seo se alafilwego ka TGF-β1 ( Seswantšho 4D ). Ge go bapetšwa le sehlopha seo se alafilwego ka TGF-β1, diteng tša mtDNA di ile tša fokotšega sehlopheng sa kalafo ya motswako ( Seswantšho 4D ), e šišinya gore IPA e ka fokotša diteng tša mtDNA gomme mo gongwe palo ya mitochondrial gammogo le go hema ga mitochondrial ( Seswantšho 3C ). Go feta moo, IPA e be e bonagala e fokotša diteng tša mtDNA kalafong ya motswako eupša ga se ya ama mošomo wa mitochondrial wo o tsenywago gare ke MTR (Difego 4A-C).
Re ile ra nyakišiša kamano ya IPA le maemo a mRNA a dikarolwana tša leabela tšeo di amanago le fibrosis, apoptosis, go phologa, le mafolofolo a mitochondrial ka diseleng tša LX-2 ( Seswantšho 5A-D ). Ge go bapetšwa le sehlopha sa taolo, sehlopha seo se alafilwego ka TGF-β1 se bontšhitše go oketšega ga polelo ya dikarolwana tša leabela tša go swana le collagen type I α2 chain (COL1A2), α-smooth muscle actin (αSMA), matrix metalloproteinase 2 (MMP2), dinama tše di thibelago metalloproteinase 1 (TIMP1), le dynamin 1-like gene (DRP1), e bontšhago go oketšega ga lephelo fibrosis le go tsenywa tirišong. Go feta moo, ge go bapetšwa le sehlopha sa taolo, kalafo ya TGF-β1 e fokoditše maemo a mRNA a nuclear pregnane X receptor (PXR), caspase 8 (CASP8), MAPKAPK3, inhibitor ya B-cell α, enhancer ya nuclear factor κ gene light peptide (NFκB1A), le inhibitor ya nuclear factor κB kinase subunit β (IKBKB) (Figure 5A–D). Ge go bapetšwa le kalafo ya TGF-β1, kalafo ya motswako ka TGF-β1 le IPA e ile ya fokotša polelo ya COL1A2 le MMP2, eupša ya oketša maemo a mRNA a PXR, TIMP1, B-cell lymphoma-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκB1-β, le IKBKB. Kalafo ya IPA e ile ya fokotša kudu polelo ya MMP2, Bcl-2-associated protein X (BAX), AKT1, optic atrophy protein 1 (OPA1), le mitochondrial fusion protein 2 (MFN2), mola polelo ya CASP8, NFκB1A, NFκB1B, le IKBKB e ile ya oketšega ge e bapetšwa le sehlopha sa taolo. Lega go le bjalo, ga go na phapano yeo e hweditšwego polelong ya caspase-3 (CASP3), apoptotic peptidase activating factor 1 (APAF1), mitochondrial fusion protein 1 (MFN1) le fission protein 1 (FIS1). Ka kakaretšo, dipoelo tše di šišinya gore kalafo ya IPA e fetoša polelo ya dikarolwana tša leabela tšeo di sepedišanago le fibrosis, apoptosis, go phologa le mafolofolo a mitochondrial. ya data ya rena e šišinya gore kalafo ya IPA e fokotša fibrosis ka diseleng tša LX-2; ka nako e swanago, e hlohleletša go phologa ka go šuthiša phenotype go ya go inactivation.
IPA e fetola polelo ya dikarolwana tša leabela tša fibroblast, apoptotic, go kgonagala, le tša mafolofolo a mitochondrial ka diseleng tša LX-2. Histograms bontša mRNA polelo mabapi le endogenous taolo (RPLP0 kapa PPIA) ka mor'a hore LX-2 lisele tse ba ile ba susumelletsa le TGF-β1 le IPA ka serum-free mahareng bakeng sa 24 h. A e bontšha di-fibroblast, B e bontšha disele tša apoptotic, C e bontšha disele tše di phelago, gomme D e bontšha polelo ya dikarolwana tša leabela tša mitochondrial dynamics. Data di tšweletšwa bjalo ka magareng ± go fapoga ga maemo (SD), n = 3 diteko tše di ikemetšego. Dipapišo tša dipalopalo di dirilwe ka go šomiša ANOVA ya tsela e tee le teko ya ka morago ga nako ya Bonferroni. * p < 0,05; ** p < 0,01; *** p < 0.001; **** p < 0,0001
Ka morago ga moo, diphetogo tša bogolo bja sele (FSC-H) le go raragana ga cytoplasmic (SSC-H) di ile tša hlahlobja ka cytometry ya go ela (Setshwantšho 6A, B), gomme diphetogo tša sebopego sa sele ka morago ga kalafo ya IPA di ile tša hlahlobja ka microscopy ya elektrone ya phetišetšo (TEM) le microscopy ya phapano ya kgato (Setshwantšho sa Tlaleletšo 6A-B). Bjalo ka ge go be go letetšwe, disele ka sehlopheng seo se alafilwego ka TGF-β1 di ile tša oketšega ka bogolo ge di bapetšwa le sehlopha sa taolo (Figure 6A,B), e bontšha katološo ya classic ya reticulum ya endoplasmic ye makgwakgwa (ER *) le phagolysosomes (P), e bontšhago go tsenywa tirišong ga sele ya kutu ya hematopoietic (HSC) (Setshwantšho sa Tlaleletšo 6A). Le ge go le bjalo, ge go bapetšwa le sehlopha seo se alafilwego ka TGF-β1, bogolo bja sele, go raragana ga cytoplasmic ( Seswantšho 6A , B ), le dikagare tša ER * di ile tša fokotšega sehlopheng sa kalafo ya motswako wa TGF-β1 le IPA ( Seswantšho sa Tlaleletšo 6A ). Go feta moo, kalafo ya IPA e ile ya fokotša bogolo bja sele, go raragana ga cytoplasmic (Figs. 6A,B), dikagare tša P le ER * (Supplementary Fig. 6A) ge di bapetšwa le sehlopha sa taolo. Ho phaella moo, dikahare tsa lisele tse apoptotic eketsehile ka mor'a 24 h ya IPA kalafo bapisoa le sehlopha sa taolo (metsu e tšoeu, Supplementary Fig. 6B). Ka kakaretšo, dipoelo tše di šišinya gore 1 mM IPA e ka hlohleletša apoptosis ya HSC le go bušetša morago diphetogo tša ditekanyetšo tša sebopego sa sele tšeo di hlohleleditšwego ke TGF-β1, ka go realo e laola bogolo bja sele le go raragana, tšeo di ka amanago le go se šome ga HSC.
IPA e fetola bogolo bja sele le go raragana ga cytoplasmic ka diseleng tša LX-2. Moemedi ditshwantsho tsa phallo cytometry and analysis. Tshekatsheko e šomišitše leano la go tsenya dikgoro leo le itšego bakeng sa disele tša LX-2: SSC-A/FSC-A go hlaloša palo ya disele, FSC-H/FSC-A go hlaola di-doublet, le SSC-H/FSC-H bakeng sa tshekatsheko ya bogolo bja sele le go raragana. Disele di ile tša bjalwa ka TGF-β1 (5 ng/ml) le 1 mM IPA ka gare ga sedirišwa sa go hloka serum ka 24 h. Disele tša LX-2 di ile tša abja ka gare ga kotara ya ka fase ya le letshadi (SSC-H-/FSC-H-), kotara ya ka godimo ya le letshadi (SSC-H +/FSC-H-), kotara ya ka fase ya le letona (SSC-H-/FSC-H +), le kotara ya ka godimo ya le letona (SSC-H +/FSC-H +) bakeng sa bogolo bja sele le tshekatsheko ya go raragana ga cytoplasmic. B. Sebopego sa sele se ile sa sekaseka ka cytometry ya go ela ka go šomiša FSC-H (go phatlalala pele, bogolo bja sele) le SSC-H (go phatlalala ka lehlakoreng, go raragana ga cytoplasmic) (ditiragalo tše 30,000). Data di hlahiswa e le bolela ± SD, n = 3 liteko ikemetseng. Dipapišo tša dipalopalo di dirilwe ka go šomiša ANOVA ya tsela e tee le teko ya ka morago ga nako ya Bonferroni. * p < 0,05; ** p < 0,01; *** p < 0.001 le **** p < 0.0001
Di-metabolite tša mala tša go swana le IPA di fetogile taba ye e fišago ya nyakišišo, e šišinya gore diphetho tše mpsha di ka utollwa ka gare ga microbiota ya mala. Ka fao go a kgahliša gore IPA, metabolite yeo re e kgokaganyago le fibrosis ya sebete bathong [15], e bontšhitšwe e le motswako wo o ka bago gona wa go lwantšha fibrotic dikaong tša diphoofolo [13, 14]. Mo, re bontšha ka lekga la mathomo tswalano magareng ga serum IPA le transcriptomics ya sebete ya lefase ka bophara le DNA methylation go batho ba ba nonnego bao ba se nago bolwetši bja swikiri bja mohuteng wa 2 (T2D), re gatelela apoptosis, mitophagy le bophelo bjo botelele, gammogo le lephelo la nkgetheng leo le kgonegago la AKT1 leo le laolago homeostasis ya sebete. Se sengwe se sefsa sa thuto ya rena ke gore re bontšhitše tirišano ya kalafo ya IPA le apoptosis, sebopego sa sele, bioenergetics ya mitochondrial le mafolofolo ka diseleng tša LX-2, go laetša sepektheramo sa maatla a fase seo se šuthišago phenotype ya HSC go ya go inactivation, go dira gore IPA e be nkgetheng yo a ka bago gona wa go kaonafatša fibrosis ya sebete.
Re hweditše gore apoptosis, mitophagy le bophelo bjo botelele e be e le ditsela tše bohlokwa kudu tša canonical tšeo di humišitšwego ka dikarolwana tša leabela tša sebete tšeo di amanago le IPA ya serum yeo e dikološwago. Kgatelelo ya tshepedišo ya taolo ya boleng bja mitochondrial (MQC) e ka lebiša go go se šome gabotse ga mitochondrial, mitophagy le apoptosis, ka go realo ya kgothaletša go direga ga MASLD [33, 34]. Ka fao, re ka fopholetša gore IPA e ka ba e amega go hlokomela mafolofolo a sele le botshepegi bja mitochondrial ka apoptosis, mitophagy le bophelo bjo botelele ka sebeteng. Datha ya rena e bontšhitše gore dikarolwana tše pedi tša leabela di be di tlwaelegile go ralala le diteko tše tharo: YKT6 le AKT1. Ke mo go swanetšego go lemoga gore YKT6 ke proteine ​​ya SNARE yeo e amegago mo tshepedišong ya go kopanya lera la sele. E kgatha tema go autophagy le mitophagy ka go bopa selo se se raraganego sa go thoma le STX17 le SNAP29 go autophagosome, ka go realo e kgothaletša go kopanywa ga di-autophagosome le di-lysosome [35]. Go feta moo, tahlegelo ya mošomo wa YKT6 e feleletša ka go senyegelwa ke mitophagy [36], mola upregulation ya YKT6 e tswalanywa le tšwelopele ya hepatocellular carcinoma (HCC), e bontšha go oketšega ga go phologa ga disele[37]. Ka lehlakoreng le lengwe, AKT1 ke lephelo la bohlokwa kudu leo ​​le dirišanago gomme e kgatha tema e bohlokwa malwetšing a sebete, go akaretša le tsela ya go laetša ya PI3K / AKT, modikologo wa sele, go huduga ga disele, go ata, go kgomarela ga tsepamiso, mošomo wa mitochondrial, le secretion ya collagen[38-40]. Tsela ya go laetša ya PI3K/AKT yeo e šomišitšwego e ka dira gore disele tša kutu tša hematopoietic (HSCs) di šome, tšeo e lego disele tšeo di ikarabelago ka tšweletšo ya matrix ya ka ntle ga sele (ECM), gomme go se laolege ga yona go ka tlaleletša go tiragalo le tšwelopele ya fibrosis ya sebete[40]. Go tlaleletša, AKT ke e nngwe ya mabaka a bohlokwa a go phologa ga disele ao a thibelago apoptosis ya sele yeo e ithekgilego ka p53, gomme go tsenywa tirišong ga AKT go ka tswalanywa le thibelo ya apoptosis ya disele tša sebete [41, 42]. Dipoelo tše di hweditšwego di šišinya gore IPA e ka akaretšwa go apoptosis yeo e amanago le mitochondria ya sebete ka go ama sephetho sa di-hepatocyte magareng ga go tsena apoptosis goba go phologa. Ditlamorago tše di ka laolwa ke dikarolwana tša leabela tša nkgetheng tša AKT le/goba YKT6, tšeo di lego bohlokwa kudu bakeng sa homeostasis ya sebete.
Dipoelo tša rena di bontšhitše gore 1 mM IPA e hlohleleditše apoptosis le go fokotša go hema ga mitochondrial ka diseleng tša LX-2 tšeo di ikemetšego ka kalafo ya TGF-β1. Go a lemogwa gore apoptosis ke tsela ye kgolo ya tharollo ya fibrosis le go tsenywa tirišong ga sele ya kutu ya hematopoietic (HSC), gomme gape ke tiragalo ye bohlokwa karabelong ya fisioloji ye e bušetšwago morago ya fibrosis ya sebete [4, 43]. Go feta fao, tsošološo ya BHI ka diseleng tša LX-2 ka morago ga kalafo ya motswako e file temogo ye mpsha ka ga tema yeo e ka bago gona ya IPA ka taolo ya bioenergetics ya mitochondrial. Ka fase ga maemo a go khutša le a go se šome, disele tša hematopoietic ka tlwaelo di šomiša mitochondrial oxidative phosphorylation go tšweletša ATP gomme di na le mošomo wa fase wa metaboliki. Ka lehlakoreng le lengwe, go tsenywa tirišong ga HSC go godiša go hema ga mitochondrial le biosynthesis go lefela dinyakwa tša maatla tša go tsena boemong bja glycolytic [44]. Taba ya gore IPA ga se ya ama bokgoni bja metaboliki le ECAR e šišinya gore tsela ya glycolytic ga e etilwe pele kudu. Ka mo go swanago, nyakišišo e nngwe e bontšhitše gore 1 mM IPA e kgonne go fetola mošomo wa ketane ya go hema ya mitochondrial ka go di-cardiomyocyte, mothaladi wa disele tša hepatocyte ya motho (Huh7) le diseleng tša endothelial tša mothapo wa popelo wa motho (HUVEC); Lega go le bjalo, ga go na mafelelo a IPA ao a hweditšwego go glycolysis ka gare ga di-cardiomyocyte, e lego seo se šišinyago gore IPA e ka kgoma bioenergetics ya mehuta e mengwe ya disele [45]. Ka fao, re fopholetša gore 1 mM IPA e ka šoma bjalo ka uncoupler ya dikhemikhale ye bonolo, ka ge e ka fokotša kudu polelo ya dikarolwana tša leabela tša fibrogenic, sebopego sa sele le bioenergetics ya mitochondrial ntle le go fetoša palo ya mtDNA [46]. Di-uncoupler tša mitochondrial di ka thibela fibrosis yeo e hlotšwego ke setšo le go tsenywa tirišong ga HSC [47] le go fokotša tšweletšo ya ATP ya mitochondrial yeo e laolwago goba yeo e hlohleletšwago ke diproteine ​​tše itšego tša go swana le diproteine ​​tša go kgaola (UCP) goba adenine nucleotide translocase (ANT). Go ya ka mohuta wa sele, tiragalo ye e ka šireletša disele go apoptosis le/goba ya kgothaletša apoptosis [46]. Le ge go le bjalo, dinyakišišo tše dingwe di a nyakega go hlakiša tema ya IPA bjalo ka uncoupler ya mitochondrial go se šome ga disele tša kutu tša hematopoietic.
Ka morago re ile ra nyakišiša ge e ba diphetogo tša go hema ga mitochondrial di bonagala ka sebopego sa mitochondrial diseleng tše di phelago tša LX-2. Ka mo go kgahlišago, kalafo ya TGF-β1 e fetoša karolo ya mitochondrial go tloga go ya nkgokolo go ya go ya magareng, ka go fokotšega ga makala a mitochondrial le go oketšega ga polelo ya DRP1, e lego selo se bohlokwa ka go arogana ga mitochondrial [48]. Go feta moo, go arogana ga mitochondrial go tswalanywa le go raragana ga netweke ka kakaretšo, gomme phetogo go tloga go kopanyo go ya go karogano e bohlokwa bakeng sa go tsenywa tirišong ga sele ya kutu ya hematopoietic (HSC), mola thibelo ya go arogana ga mitochondrial e lebiša go apoptosis ya HSC [49]. Ka go realo, dipoelo tša rena di laetša gore kalafo ya TGF-β1 e ka hlohleletša go fokotšega ga go raragana ga netweke ya mitochondrial ka go fokotšega ga makala, yeo e tlwaelegilego kudu ka go arogana ga mitochondrial yeo e amanago le disele tša kutu tša hematopoietic tše di šomišitšwego (HSCs). Go feta fao, ya data ya rena e bontšhitše gore IPA e ka fetoša karolo ya mitochondria go tšwa go sebopego sa nkgokolo go ya go sa magareng, ka go realo ya fokotša polelo ya OPA1 le MFN2. Dinyakišišo di bontšhitše gore downregulation ya OPA1 e ka hlola go fokotšega ga bokgoni bja lera la mitochondrial le go hlohleletša apoptosis ya sele[50]. MFN2 e tsebja ka go tsena gare ga go kopanywa ga mitochondrial le apoptosis[51]. Dipoelo tše di hweditšwego di šišinya gore induction ya disele tša LX-2 ka TGF-β1 le / goba IPA e bonala e fetola sebopego le bogolo bja mitochondrial, gammogo le mmušo wa go tsenya tirišong le go raragana ga netweke.
Dipoelo tša rena di laetša gore kalafo ya motswako ya TGFβ-1 le IPA e be e ka fokotša mtDNA le ditekanyetšo tša sebopego sa sele ka go laola polelo ya mRNA ya fibrosis, apoptosis le dikarolwana tša leabela tše di amanago le go phologa ka diseleng tšeo di efogago apoptosis. Ka nnete, IPA e ile ya fokotša maemo a polelo ya mRNA ya AKT1 le dikarolwana tša leabela tša bohlokwa tša fibrosis tša go swana le COL1A2 le MMP2, eupša ya oketša maemo a polelo ya CASP8, yeo e amanago le apoptosis. Diphetho tša rena di bontšhitše gore ka morago ga kalafo ya IPA, polelo ya BAX e ile ya fokotšega gomme polelo ya mRNA ya diyuniti tše nnyane tša lapa la TIMP1, BCL-2 le NF-κB e ile ya oketšega, e šišinya gore IPA e ka hlohleletša matshwao a go phologa ka diseleng tša kutu tša hematopoietic (HSCs) tšeo di efogago apoptosis. Dimolekule tše di ka šoma bjalo ka matshwao a go thekga go phologa ka diseleng tša kutu tša hematopoietic tše di šomišitšwego, tšeo di ka tswalanywago le go oketšega ga polelo ya diprotheine tša go lwantšha apoptotic (tše bjalo ka Bcl-2), go fokotšega ga polelo ya BAX ya go thekga apoptotic, le papadi ye e raraganego magareng ga TIMP le NF-κB [5, 7]. IPA e diriša ditlamorago tša yona ka PXR, gomme re hweditše gore kalafo ya motswako le TGF-β1 le IPA e okeditše maemo a polelo ya PXR mRNA, e bontšha go gatelela go tsenywa tirišong ga HSC. Activated PXR signaling e tsebja ka go thibela go tsenywa tirišong ga HSC ka bobedi ka vivo le ka vitro [52, 53]. Dipoelo tša rena di laetša gore IPA e ka tšea karolo go tlošeng di-HSC tše di šomišitšwego ka go kgothaletša apoptosis, go fokotša fibrosis le metabolism ya mitochondrial, le go godiša matshwao a go phologa, e lego ditshepedišo tše di tlwaelegilego tšeo di fetošago phenotype ya HSC yeo e šomišitšwego go yeo e sa šomego. Tlhaloso e nngwe e kgonegago ya mokgwa wo o ka bago gona le tema yeo e kgathwago ke IPA ka apoptosis ke gore e scavenges mitochondria yeo e sa šomego kudu kudu ka mitophagy (tsela ya ka gare) le tsela ya go laetša ya TNF ya ka ntle (Table 1), yeo e kgokagantšwego ka go lebanya le tsela ya go laetša ya go phologa ya NF-κB (Setshwantšho sa Tlaleletšo 7). Se se kgahlišago ke gore dikarolwana tša leabela tše di humišitšwego tšeo di amanago le IPA di kgona go hlohleletša matshwao a go thekga apoptotic le a go thekga go phologa tseleng ya apoptotic [54], e lego seo se šišinyago gore IPA e ka hlohleletša tsela ya apoptotic goba go phologa ka go dirišana le dikarolwana tše tša leabela. Le ge go le bjalo, ka fao IPA e hlohleletšago apoptosis goba go phologa nakong ya go tsenywa tirišong ga HSC le ditsela tša yona tša motšhene di sa dutše di sa hlaka.
IPA ke metabolite ya diphedinyana tše nnyane yeo e bopilwego go tšwa go tryptophan ya dijo ka microbiota ya mala. Dinyakišišo di bontšhitše gore e na le dithoto tša taolo ya go lwantšha go ruruga, antioxidant le epigenetic tikologong ya mala.[55] Dinyakišišo di bontšhitše gore IPA e ka fetola mošomo wa lepheko la mala le go fokotša kgateletšego ya oxidative, yeo e ka tlaleletšago ditlamoragong tša yona tša fisioloji tša lefelong leo.[56] Ge e le gabotse, IPA e išwa go ditho tše di lebantšwego ka go elela ga madi, gomme ka ge IPA e abelana sebopego se se swanago se segolo sa metabolite le tryptophan, serotonin le ditšweletšwa tša indole, IPA e dira ditiro tša metaboliki tšeo di feleletšago ka pheletšo ya metaboliki ya phadišano.[52] IPA e ka phadišana le di- metabolite tšeo di tšwago go tryptophan bakeng sa mafelo a go tlama go diensaeme goba di- receptor, e lego seo se ka šitišago ditsela tše di tlwaelegilego tša metaboliki. Se se gatelela go nyakega ga dinyakišišo tše dingwe ka ga pharmacokinetics ya yona le pharmacodynamics go kwešiša gakaone lefasetere la yona la kalafo.[57] Go sa dutše go tla bonwa ge e ba se se ka direga gape ka diseleng tša kutu tša hematopoietic (HSCs).
Re dumela gore thuto ya rena e na le mafokodi a itšego. Go hlahloba ka mo go kgethegilego mekgatlo yeo e tswalanago le IPA, re ile ra kgaphela ka ntle balwetši bao ba nago le bolwetši bja swikiri bja mohuta wa bobedi (T2DM). Re dumela gore se se lekanyetša go šoma mo go nabilego ga dikhwetšo tša rena go balwetši bao ba nago le bolwetši bja swikiri bja mohuta wa bobedi le bolwetši bjo bo tšwetšego pele bja sebete. Le ge e le gore mahloriso a fisioloji a IPA ka serum ya batho ke 1-10 μM [11, 20], mahloriso a 1 mM IPA a ile a kgethwa go ya ka mahloriso a godimodimo ao e sego a mpholo [15] le seelo se se phagamego kudu sa apoptosis, go se na phapano ka phesente ya palo ya disele tša necrotic. Le ge e le gore maemo a supraphysiological a IPA a ile a šomišwa nyakišišong ye, ga bjale ga go na kwano mabapi le tekanyo ye e šomago ya IPA [52]. Le ge e le gore dipoelo tša rena di bohlokwa, pheletšo ye e nabilego ya metaboliki ya IPA e sa dutše e le lefelo le le šomago la nyakišišo. Go feta moo, diphetho tša rena mabapi le tswalano magareng ga maemo a serum IPA le DNA methylation ya dingwalwa tša sebete ga se tša hwetšwa feela go tšwa diseleng tša kutu tša hematopoietic (HSCs) eupša gape le go tšwa go ditlhalenama tša sebete. Re ile ra kgetha go diriša disele tša batho tša LX-2 go ithekgile ka diphetho tša rena tša nakong e fetilego go tšwa go tshekatsheko ya transcriptome gore IPA e tswalanywa le go tsenywa tirišong ga sele ya kutu ya hematopoietic (HSC) [15], gomme di-HSC ke disele tše dikgolo tšeo di akaretšwago tšwelopeleng ya fibrosis ya sebete. Sebete se bopilwe ka mehuta ye mentši ya disele, ka fao dika tše dingwe tša disele tša go swana le tshepedišo ya setšo sa sele ya hepatocyte-HSC-immune yeo e kopantšwego le go tsenywa tirišong ga caspase le go arogana ga DNA gammogo le mokgwa wa tiro go akaretšwa maemo a proteine ​​e swanetše go elwa hloko go ithuta tema ya IPA le tirišano ya yona le mehuta ye mengwe ya disele tša sebete.